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《中国人民解放军军医进修学院》 2012年
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人脐带间充质干细胞治疗卵巢早衰的初步实验研究

俞凌  
【摘要】:卵巢早衰(Premature ovarian failure,POF)是指妇女青春期发育后若在40岁前发生闭经、卵巢萎缩、体内雌激素水平低落、促性腺激素水平高达绝经期水平的现象。POF已经成为当今妇女不孕症的最主要病因。本研究旨在构建小鼠卵巢早衰模型,以此为基础研究人脐带间充质干细胞及其浓缩液治疗卵巢早衰的可行性;初步探讨了人脐带间充质干细胞改善卵巢功能的可能机制。论文分为四部分,第一部分为人脐带间充质干细胞对卵巢早衰治疗作用的研究;第二部分是人脐带间充干细胞浓缩液对卵巢早衰治疗作用的研究;第三部分是人脐带间充质干细胞及其浓缩液对卵巢早衰卵母细胞的作用;第四部分人脐带间充干细胞对卵巢早衰治疗作用分子机制的初步研究。 一、人脐带间充质干细胞对卵巢早衰治疗作用的研究 目的:应用人脐带间充质干细胞(umbilical cord Mesenchymal stem cells,UCMSCs)治疗小鼠卵巢早衰模型,观察治疗效果。方法:将野生型美国癌症研究所(Institute of Cancer Researcch, ICR)选育的小鼠随机分为A、B、C、D四组(n=20只), A、B、C三组小鼠采用环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX)致卵巢早衰,A组不经任何救治,B组在卵巢原位注射UCMSCs,C组小鼠经尾静脉注射UCMSCs,D组为空白对照组。比较四组之间卵泡数量、卵巢组织HE染色,卵巢组织内凋亡细胞数量等检测指标的差异,以此来观察UCMSCs对卵巢早衰的治疗效果。结果:成功建立了UCMSCs体系;成功建立了环磷酰胺致小鼠卵巢早衰模型;经过治疗的POF小鼠卵泡数量和质量均得到明显改善,凋亡细胞的数量明显减少。结论:本次研究表明,UCMSCs对于小鼠CTX所致卵巢早衰有明显的治疗作用,可能通过改善卵泡数量和质量以及减少卵巢内凋亡的细胞数来有效改善卵巢功能。 二、人脐带间充干细胞浓缩液对卵巢早衰治疗作用的研究 目的:应用UCMSCs浓缩液治疗小鼠卵巢早衰模型,观察治疗效果。方法:选择生长最为旺盛的UCMSCs将其培养基更换为无血清培养基,继续培养48小时后搜集培养基,作为浓缩液(Conditioned medium, CM)备用;将野生型ICR小鼠随机分为A、B、C、D四组(n=20只),A、B、C三组小鼠采用化疗药物CTX致卵巢早衰,A组不经任何救治,B组小鼠经尾静脉注射CM,C组小鼠经尾静脉注射无血清培养基(Chemically Defined Mesenchymal Stem Cell Growth Medium,MSCGD),A、D两组小鼠经尾静脉注射同等剂量的PBS,D组为空白对照组。比较四组之间卵泡数量、卵巢组织HE染色,卵巢组织内凋亡细胞数量等检测指标的差异。结果:成功获取了UCMSCs浓缩液;经过治疗的POF小鼠卵泡数量和质量均得到明显改善,凋亡细胞的数量明显减少。结论:本次研究表明,CM对于小鼠CTX所致卵巢早衰有明显的治疗作用,推测是CM中UCMSCs分泌的一些因子起到了改善卵泡数量和质量以及减少卵巢内凋亡的细胞的作用,并借此有效改善了卵巢功能。 三、人脐带间充质干细胞及其浓缩液对卵巢早衰卵母细胞的作用 目的:应用UCMSCs及其浓缩液治疗小鼠免疫损伤卵巢,观察治疗效果。方法:将小鼠分为A、B、C、D、E、F六组(n=20只),A、C、D、E四组皮下多点注射小鼠透明带肽和弗氏完全佐剂(Zona pellucida, ZP3+complete Freund’sadjuvant, CFA)诱导卵巢免疫损伤,A组不经任何救治,C组经尾静脉注射UCMSCs,D组经尾静脉注射CM,E组经尾静脉注射MSCGD,B组皮下多点注射CFA,F组为空白对照组。通过观察卵泡的数量和质量、卵母细胞的数量和质量来观察UCMSCs及其浓缩液对卵巢早衰的治疗效果。结果:成功建立了小鼠卵巢早衰免疫模型;经过治疗的免疫模型小鼠卵母细胞数量明显升高,死亡的卵母细胞数明显减少,卵泡数量并未出现明显改善但质量有所提高。结论:UCMSCs及其浓缩液对小鼠卵巢早衰免疫模型有治疗作用,主要是对卵母细胞质量和数量有很大改善。对于治疗免疫因素导致卵巢早衰的病人,恢复病人的生育能力提供了新的思路。 四、人脐带间充干细胞对卵巢早衰治疗作用分子机制的初步研究 目的:应用UCMSCs治疗环磷酰胺致小鼠卵巢早衰模型,探讨两者改善卵巢功能的具体机制。方法:将ICR小鼠随机分为A、B、C三组(n=20只),A、B组小鼠采用CTX致卵巢早衰,A组不经任何救治,B组小鼠经尾静脉移植UCMSCs,C组小鼠为空白对照组。通过基因芯片分析A、B、C三组小鼠卵巢组织中基因表达谱的差异。结果:基因芯片筛选出多个差异表达基因,很多基因在生命代谢的通路中起到重要作用。结论:UCMSCs可以改变卵巢组织中某些基因的表达水平,从而影响卵巢功能,为我们进一步探索UCMScs治疗卵巢早衰的机制奠定了基础。
【学位授予单位】:中国人民解放军军医进修学院
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R711.75

【引证文献】
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【参考文献】
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【同被引文献】
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