APA微囊化BCC脑内移植治疗MPTP帕金森病样猴长期效应的研究：行为、功能影像及组织形态学观察

【摘要】： 目的 在前期研究的基础上，进一步了解MPTP诱发偏侧PD样猴的脑组织形态改变；了解APA微囊化牛肾上腺髓质嗜铬细胞(APA-BCC)脑内移植改善PD样猴异常行为的长期效应；观察移植物在宿主脑内的存在状况，了解APA微囊的免疫隔离效应并了解APA-BCC脑内移植的安全性。 方法 (1)9只成年恒河猴，右侧颈内动脉注射MPTP，制备成偏侧帕金森病样猴模型。(2)将模型猴分成：APA-BCC组6只(M2，M3，M4，M6，M7，M8)；空囊组1只(M5)：裸细胞(BCC)组2只(M1，M9)。在立体定位仪下进行右侧尾状核、壳核多点注射，分别植入定量APA-BCC、空囊、BCC。术后定期进行临床行为检查。(3)术后48个月，APA-BCC组的M4进行了"C-Raclopride标记PET检查。(4)术后14-28个月，8只帕金森病样猴麻醉后进行灌注固定，取脑和脊髓进行病理观察。(5)常规神经病理方法及TH，GFAP，CD3，CD20，CD68，HLA-DR等抗体免疫组化染色分别用于验证帕金森样猴病理模型，观察移植物状况、移植细胞成活状态及移植区邻近的组织结构情况、移植区免疫反应情况及移植创伤反应。 结果 (1)9只猴在注射MPTP后均成功的产生了帕金森病样症状。8只模型猴生存24-32个月的组织学检查显示损伤侧中脑黑质致密带较健侧 一 细胞数量明显减少达80％以上，细胞体积变小，未见＊ 样小体。 Q）移植后APA—BCC组的帕金森病样症状改善较非微囊组持续时间普 遍要长，非微囊组在卜 个月症状退回到移植前状态。APA－BCC组内有2只 （M3，M4）接近于恢复正常，持续时间达 28－48个月，而 4只（MZ，M6， M7，MS）移植后症状改善轻，持续时间短，分别于移植后1年在相同部位 重复移植入同一剂量的囊化BCC。在第二次移植后，l只（M6）猴症状改善 持续时间14个月。移植空囊的症状无改善。 3）4号猴于移植术后 48月行’‘CKaclopride PET功能显像显示移植的右 侧纹状体区DZ受体活性区较对侧增大。 （4）有 8只猴完成了组织病理学检查。APA－BCC组：2只 PD样猴（M3， M6，移植后1428个月）脑内注射点观察到大量微囊，形态完整，呈圆形， 囊内可见成活的BCC，移植区周边纹状体内TH阳性纤维密度较对侧明显增 高，而在微囊完整的移植区内未见到 CD3和 CD20阳性表达细胞。3只 PD 样猴（MZ，M7，MS）移植区未观察见微囊，而在局部呈小灶性细胞聚集反 应，以胶质细胞和单核细胞成分为主，周边有小血管增生及出血。无成活BCC。 免疫组化染色显示在微囊破损严重的移植区，以GFAP阳性的胶质细胞和纤 维成分为主，有较多CD68、CD3和CD20阳性细胞浸润。BCC组：在注射 点未见成活BCC，代之为局灶细胞聚集反应，周边小血管增生，主要为胶质 细胞和单核细胞反应。空囊组：在尾状核注射点观察到散在囊状结构，但囊 壁皱缩，周边有少量单核样细胞浸润。移植后脑组织无严重感染、出血、肿 瘤样异常增生等不良反应。 结论 u）MPTP注射后的损伤侧黑质致密带细胞改变符合帕金森病 主要组织病理学特征，模型动物的偏侧帕金森病样症状是黑质纹状体系统损 伤所致 因 七帕金森病样猴模型制备是成功的。 4 一 （二）脑内植入APA－BCC可纠正MPTP偏侧帕金森病样猴的异常行为超 过48个月。 （3）APA－BCC可在异种宿主脑内保持完好超过28个月，APA－BCC在脑 内的完好状态及移植区多巴胺能纤维再生反应与帕金森病样猴的异常行为 改善有关。 （4）微囊具有免疫隔离作用。 （5）APA．BCC脑内移植后 23－28月无明显宿主脑、脊髓的损伤。