胰腺癌患者肿瘤组织及外周血浆中癌基因和抑癌基因的研究

【摘要】： 胰腺癌是目前预后最差的恶性肿瘤之一，近年来其发病率呈上升趋势。胰腺癌早期症状不典型，缺乏简单、方便的检查手段，特别是缺乏特异性肿瘤标记物，是造成胰腺癌早期诊断困难的重要原因。 随着肿瘤分子生物学研究的不断深入，发现胰腺癌的发生发展与多个基因的改变有关，包括原癌基因K-ras的激活及抑癌基因p53、p16、DPC4基因的失活等，基因诊断有望给胰腺癌的早期诊断带来突破。近年来研究从胰腺穿刺活检组织、胰液、十二指肠液和粪便等标本中检测到频繁的K-ras基因突变，为胰腺癌的早期诊断提供了可能。而p53基因突变的检测用于胰腺癌的诊断和预后判断等也引起广泛关注。但基因突变检测方法限于传统的基因表达、序列测定、突变和多态性分析等，只适用于少数样品的测定，操作步骤多且费力，不便于自动化。因此，本研究设计采用采用基因突变寡核苷酸芯片技术检测胰腺癌K-ras基因及p53基因点突变，旨在探讨K-ras、p53基因突变检测及联合应用对胰腺癌早期诊断的价值，筛选出适合临床应用的高效、简便、快捷的胰腺癌诊断方法。 材料与方法：选择诊断明确的25例胰腺癌患者和5例慢性胰腺炎患者，采集新鲜组织标本和外周血标本，分别提取肿瘤组织DNA和外周血浆游离DNA，PCR扩增后，与寡核苷酸芯片杂交，检测肿瘤组织和外周血浆中K-fas基因第12、13、61密码子及p53 中文摘要 基因第 5、7外显子点突变，并与肿瘤标记物 CA－9比较，评价其 临床应用价值。 结果：l、胰腺癌患者肿瘤组织K－ras基因突变率为76刀％ （19／25），外周血血浆游离 DNA中 K－ras基因突变率为 52．0O （I3／25），二者均可见于肿瘤早期，慢性胰腺炎患者手术切除组织 标本中K－ras基因突变率为20％门乃），外周血浆游离DNA中未见 K－ras基因突变；K－ras基因突变以第 1外显子第 12密码子突变为主， 也发现少数第 2外显子第 61密码子突变；胰腺癌患者血浆 K－ras基 因突变与血浆CA－9联合检测阳性率960（24／25），高于单独检 测卜性率…＜0＊5）。 2、胰腺癌患者肿瘤组织P53基因突变率为32．0％（S／25），外 周血血浆游离DNA中的3基因突变率为20．0％（5／25），p53基因突 变在H、IV期胰腺癌患者发主率高，与1、11期患者比较差异有 显著性意义，慢性胰腺炎患者手术切除组织标本及外周血浆游离 DNA中未见K1as基因突变：P53基因无明显突变热点，其突变形 式有多种，以GC—AT碱基转换为主（87．5％，7／8）；胰腺癌患者P53 与K－I’SS基因突变联合检测阳性率明显提高，并可明显提高其特异 度。 结论：l、胰腺癌患者K－ras基因突变阳性率高，可出现于早期 患者，检测血浆游离DNA中K－ras基因突变为胰腺癌的早期诊断。 初步筛选提供了手段。联合检测血浆K｛as基因突变与血浆CA19习， 可提高诊断敏感性。 2小53基因突变在胰腺癌患者发生率较高，且与病理分期有关， 检测p53基因突变特异性强，并能在一定程度上判断肿瘤的临床过 程及预后。联合检测p53基因与K｛as基因突变敏感性明显提高， 2 中文摘要 并可明显提高胰腺癌诊断的特异性。 3、寡核苦酸芯片检测K｛as基因、p53基因突变操作简单快捷。 支全可靠、敏感性高，并能同时明确突变类型，具有较高临床应用 价值。基因芯片技术的进一步开发和应用将为胰腺癌的诊断及鉴别 诊断开创一个新局面。