白血病细胞WT1基因的表达机理

【摘要】：WT1基因位于染色体11P13上，被认为是一个肿瘤抑制基因，编码产生一种具有锌指结构的转录因子，在正常造血及白血病的发生和发展中起着重要作用。WT1基因表达能部分地抑制维甲酸或维生素D3诱导的白血病细胞系的分化过程。WT1基因在正常骨髓及外周血中的CD34~+CD33~-细胞中表达，但表达水平很低；多数急性白血病均有WT1基因表达，慢性粒细胞白血病慢性期及慢性淋巴细胞白血病细胞无表达。 基因启动子区DNA甲基化水平在基因表达调控中起着重要作用，DNA超甲基化常抑制基因表达，文献报告一些实体瘤WT1基因发生了甲基化，但并未影响其表达；白血病细胞WT1基因启动子区DNA甲基化水平以及甲基化与WT1基因表达的关系尚未见文献报告。我们在甲基化敏感PCR(MS-PCR)的基础上进行改良，结合内切酶消化的新技术对白血病细胞系WT1基因启动子区DNA的甲基化水平及DNA超甲基化对WT1基因表达的影响进行了研究，在此基础上又进一步研究了去甲基化处理及组蛋白脱乙酰基酶抑制剂TSA对WT1基因表达的影响，探讨了WT1基因表达的调控机制，取得了比较满意的研究结果。 本研究共三部分，第一部分：探究WT1基因在正常血细胞及白血病细胞中的表达，该部分针对以前关于WT1基因表达上的一些误区进行了研究，结果纠正了以前关于WT1基因在正常骨髓和外周血细胞表达认识上的一些失误；第二部分：探讨白血病及正常血细胞WT1基因启动子区DNA的甲基化状况，研究了一些白血病细胞系、急性白血病初治病例骨髓单个核细胞、慢性粒细胞白血病慢性期和急变期病例骨髓单个核细胞及正常人骨髓细胞启动子区DNA的甲基化状态，并分析甲基化与WT1基因表达的关系，结果提示：正常血细胞及某些白血病细胞WT1基因发生了 解放军总医院军医进修学院 博士学位论文 甲基化，单纯基因启动子DNA的甲基化并不能抑制其表达:第三部分， 研究DNA甲基化、组蛋白乙酞化与WTI基因表达调控，该部分应用去甲 基化药物、组蛋白去乙酞化酶抑制剂TSA研究了WTI基因的表达机制， 结果发现去甲基化与TSA协同处理可以诱导正常WTI基因不表达的白血 病U937细胞系重新表达WTI基因mRNA。