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《中国人民解放军军医进修学院》 2005年
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乙型肝炎病毒表面抗原蛋白反式调节作用的研究

纪冬  
【摘要】:乙型肝炎病毒(HBV)感染是严重影响我国人民健康的重要传染病。尽管抗病毒治疗在一部分患者中取得了一定的疗效,但总的疗效不满意。因此,必须探索新的治疗技术和方法,要探索新的治疗技术和方法,就要以肝炎病毒致病的机制作为基础。我们应用分子生物学技术对于肝炎病毒与肝细胞之间相互作用的分子生物学机制进行系统的探讨,目的是为病毒性肝炎新型治疗技术和方法的研究寻找新的思路、奠定理论基础。 HBV是一种嗜肝部分双链DNA病毒,其基因组长约3.2kb,具有4个主要的开放读码框架(ORF),分别命名为S、C、P、X区,其中S区通过三个框架(in-frame)内起始密码子(ATG)分为三个结构域:前-S1,前-S2和S结构域,从这三个ATG开始编码产生三种大小不等的表面抗原蛋白:主蛋白(SHBs),中蛋白(MHBs:前-S2+S)和大蛋白(LHBs:前-S1+前-S2+S)。HBV表面抗原蛋白具有多种功能,其中反式调节功能在HBV致病(癌)过程中发挥着重要的作用。 为研究HBV表面抗原蛋白的反式调节作用,我们以分子生物学技术构建表面抗原蛋白的真核表达载体pcDNA3.1(-)-SHBs、pcDNA3.1(-)-PreS1、pcDNA3.1(-)-PreS2,并将构建好的重组质粒转染HepG2细胞,以空载体为平行对照,制备细胞裂解液。应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization, SSH)技术,构建表面抗原蛋白激活基因差异表达的cDNA消减文库,转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆,多聚酶链反应(PCR)扩增后进行测序及同源性分析。对转染后的细胞裂解液同时应用基因表达谱芯片技术筛选差异表达的mRNA。筛选到的cDNA全长序列,包括一些与细胞生长调节、细胞内信号转导、蛋白质翻译合成、肿瘤、物质代谢密切相关的蛋白编码基因,推测表面抗原蛋白在体内可能存在的调控机制的线索,并发现一些未知功能的基因,其中之一命名为HBV前-S1蛋白反式激活蛋白1(PS1TP1)。 在新基因功能研究方面,我们对PS1TP1的功能进行了初步探讨。应用生物信息学及常规分子生物学技术从HepG2细胞中得到了PS1TP1基因的编
【学位授予单位】:中国人民解放军军医进修学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R373.2

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
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【共引文献】
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中国博士学位论文全文数据库 前3条
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【二级参考文献】
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10 成军;郭江;洪源;王春花;张黎颖;邓红;;构建丙型肝炎病毒非结构蛋白NS2反式调节基因消减文库[A];中华医学会全国第九次感染病学学术会议论文汇编[C];2006年
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1 本报记者 靖九江;探寻病毒性肝炎的未知世界[N];中国医药报;2002年
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1 陈跃军;表皮生长因子受体反式调节G蛋白偶联受体功能的研究[D];复旦大学;2008年
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1 郭江;丙型肝炎病毒p7蛋白反式调节作用的研究[D];山西医科大学;2005年
2 陶明亮;应用抑制性消减杂交技术筛选p7TP3剪切体1反式激活基因[D];西北农林科技大学;2007年
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