收藏本站
《中国人民解放军军医进修学院》 2008年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

聚乳酸聚乙醇酸/RNAⅢ抑制肽缓释微球的制备和预防骨科内植物葡萄球菌感染的实验研究

张小斌  
【摘要】: 目的 骨科内植物感染一直是个棘手的问题,人工关节置换术后感染更是灾难性的并发症,治疗也更具挑战性。骨科内植物感染以产生物被膜的金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌引起的慢性感染最为常见,由于细菌耐药问题越来越严重,所以迫切需要更加有效的方法来治疗耐药菌引起的骨科内植物尤其是人工关节感染。研究证明RIP可以抑制所有葡萄球菌菌株的毒性,是一种作用机制不同于传统抗菌素的全新制剂,本研究采用固相合成法、反相液相色谱法合成并提纯得到高纯度RIP,改良复乳-溶剂挥发法制备PLGA/RIP缓释微球,分析其表征;体外研究PLGA/RIP缓释微球的洗提学特征和抑菌活性,并对PLGA/RIP缓释微球的组织相容性和血液相容性进行评价;在前期实验的基础上建立全新的兔膝关节置换术后慢性感染的模型,以期真实模拟临床上常见的慢性感染,研究PLGA/RIP缓释微球在体内预防表皮葡萄球菌造成的兔膝关节置换术后慢性感染的效果。 方法 1、PLGA/RIP缓释微球的构建和体外洗提学研究:根据已知的氨基酸序列,采用固相合成法合成RIP粗品,利用反相高效液相法对RIP粗品进行纯化,对纯化后的RIP肽进行质谱分析、氨基酸组成分析、氨基酸序列分析和红外光谱分析。采用改良复乳-溶剂挥发法制备PLGA/RIP缓释微球,观察其表征,测定缓释微球的载药率和包封率。采用高效液相色谱法测定不同时点不同浓度PLGA/RIP洗提液的pH值变化,RIP的释放速度、累积释放量和洗提液中RIP的浓度,观察PLGA/RIP微球的体外释药特点。通过PLGA/RIP缓释系统对金黄色葡萄球菌ATCC25923的抑制,测定其有效抑菌环直径,比较不同时点洗提液抑菌环直径大小,判断不同浓度洗提液抑菌活性大小。 2、体外研究PLGA/RIP缓释微球的血液相容性和组织相容性:选择溶血实验、凝血实验、血小板聚集实验,测定凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间、观察PLGA/RIP缓释微球对兔白细胞、红细胞和血小板的影响,对PLGA/RIP血液相容性进行评价。选择急性全身毒性试验、MTT细胞毒性试验、肌肉内植入试验、过敏试验和热源试验,对聚乳酸乙醇酸/RNAⅢ抑制肽缓释微球的组织相容性进行评价。 2、PLGA/RIP缓释微球预防兔膝关节置换术后葡萄球菌慢性感染的实验研究:在前期实验的基础上建立全新的兔膝关节置换术后慢性感染的模型,测定白细胞、C-反应蛋白、病理学检查、扫描电镜观察和激光共聚焦扫描检查,研究PLGA/RIP缓释微球在体内预防表皮葡萄球菌造成的兔膝关节置换术后慢性感染的效果。 结果 1、PLGA/RIP缓释微球的构建和体外洗提学研究:采用固相合成的方法可以合成得到稳定的RIP,经反相高效液相法纯化可得到纯度为96.8%的多肽,通过质谱分析、氨基酸组成分析、氨基酸序列分析、傅立叶红外光谱分析显示本研究中合成的RIP具有和天然RIP相同的氨基酸组成和序列结构。采用改良复乳-溶剂挥发法制备的PLGA/RIP缓释微球粒径均匀、表面光滑,包封率约为(68.22±6.20)%,载药率为(15.35±3.26)%。PLGA/RIP前12小时释药动力学方程为y=3.8507x+10.193,30天累积释药动力学方程为y=31.016x+59.611,均符合Huguchi方程,是较为理想的缓释载药体系。体外抑菌实验表明PLGA/RIP缓释微球具有抑菌活性。 2、PLGA/RIP缓释微球的血液相容性和组织相容性研究:溶血实验、凝血实验和血小板聚集实验,凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间测定证实了PLGA/RIP缓释微球对兔的溶血、凝血时间、血小板聚集以及白细胞、红细胞和血小板地数量均无明显影响,具有良好的血液相容性;急性毒性试验、MTT细胞毒性试验、肌肉内植入试验、过敏试验及热原试验证实了PLGA/RIP缓释微球不引起全身毒性反应,无细胞毒性,未见免疫排斥,不引起过敏反应,无热源性,具有良好的组织相容性和安全性。 3、PLGA/RIP缓释微球预防兔膝关节置换术后葡萄球菌慢性感染的实验研究:通过白细胞计数、C-反应蛋白、病理学检查、荧光显微镜、扫描电镜和激光共聚焦扫描证实,术后兔膝关节每天注入1×10~2CFU的表皮葡萄球菌ATCC35984菌液0.25mL最终会导致实验动物发生慢性感染,而PLGA/RIP缓释微球在局部持续释放,可以预防持续存在的小剂量致病菌造成的兔膝关节置换术后慢性感染。 结论 采用固相合成法和反相高效液相色谱法可以制备高纯度的RIP,合成的RIP具有与天然RIP相同的结构组成和抑菌活性;采用改良复乳-溶剂挥发法制备的PLGA/RIP缓释微球粒径均匀、表面光滑,包封率和载药率较高,体外释放动力学符合Huguchi方程,是理想的缓释载药体系。PLGA/RIP缓释微球具有良好的血液相容性和组织相容性,可以安全地应用于关节局部。术后兔膝关节每天注入1×10~2CFU的表皮葡萄球菌ATCC35984菌液0.25mL最终会导致实验动物发生慢性感染,而PLGA/RIP缓释微球在局部持续释放,可以预防持续存在的小剂量致病菌造成的兔膝关节置换术后慢性感染。
【学位授予单位】:中国人民解放军军医进修学院
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R318.08

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 杨晓芳,奚廷斐;生物材料生物相容性评价研究进展[J];生物医学工程学杂志;2001年01期
2 郝立波,韩黎,王岩,周勇刚,王继芳,孟玉芬;髋关节置换后感染的微生物学分析和生物被膜研究[J];微生物学通报;2005年04期
3 潘妍,徐晖,赵会英,魏刚,郑俊民;胰岛素乳酸/羟基乙酸共聚物纳米粒的制备及口服药效学研究[J];药学学报;2002年05期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 邢庆昌;RNAⅢ抑制肽防治骨科内植物葡萄球菌感染的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2007年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张德刚;于腾波;;人工关节置换术后假体感染的诊断和治疗研究进展[J];青岛大学医学院学报;2010年01期
2 田嘉军,郑华,陈敦春,王定国;生物衍生组织工程骨支架材料生物学评价[J];北京生物医学工程;2003年04期
3 王喜云;王远亮;;生物材料的生物学评价方法研究进展[J];北京生物医学工程;2007年01期
4 赵雄;曹晓涵;马玉媛;吕茂民;尹惠琼;刘明;章金刚;;纤维蛋白止血敷料的生物相容性研究[J];中国输血杂志;2010年04期
5 牟善松,屠美,丁珊,周长忍;不同材料包裹的肝素缓释微囊生物相容性评价[J];材料导报;2003年05期
6 屠美,牟善松,周长忍;基材与液晶种类对液晶复合膜血液相容性的影响[J];材料科学与工程学报;2005年03期
7 葛亮;苟三怀;杨四川;汪世龙;;注射式复合纳米人工骨的生物相容性和降解性能的实验研究[J];第二军医大学学报;2006年10期
8 周辰;冯岚;;胰岛素制剂的研究进展[J];中国医药导刊;2006年05期
9 戴建国,黄培林,郭英,伍健;细胞周期检测作为生物相容性评价指标的研究[J];东南大学学报(自然科学版);2005年02期
10 苏保;蒋电明;严永刚;赵增辉;李军;;氨基酸聚合物/硫酸钙生物工程骨的生物相容性研究[J];第三军医大学学报;2011年01期
中国重要会议论文全文数据库 前3条
1 王华明;王江;曹阳;;淀粉微球的制备和应用[A];2009中国功能材料科技与产业高层论坛论文集[C];2009年
2 南运东;尹培荣;;关节置换术后感染[A];2006年贵州省医学会骨科学分会学术年会论文汇编[C];2006年
3 冯年平;武培怡;;中药纳米制剂探讨[A];纳米材料和技术应用进展——全国第三届纳米材料和技术应用会议论文集(下卷)[C];2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘强;基于优化血液相容性的生物医用金属材料表面设计与改性[D];江苏大学;2010年
2 刘晓峰;鹿茸多肽纳米复合材料对成骨细胞及骨愈合的影响[D];吉林大学;2011年
3 董莹;钛支架人工角膜生物相容性的临床和实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
4 陈欢;阳离子聚合物介导的基因输送在复合组织再生修复中的应用及免疫效应研究[D];南京大学;2011年
5 代震宇;纳米羟基磷灰石/聚氨基酸复合材料的制备与应用研究[D];重庆医科大学;2011年
6 戴程隆;用于局部快速止血和骨修复的可降解介孔硅基干凝胶设计制备与性能研究[D];华东理工大学;2011年
7 文锐;抗凝改性血液净化滤器膜构建及性能研究[D];中南大学;2010年
8 胡欣;齿科修复用钛—锆—铌—锡合金研制及临床应用研究[D];天津医科大学;2011年
9 李伟;生物可降解稀土镁合金血管支架无缝管材的制备技术及性能研究[D];重庆大学;2011年
10 杨丽;全血灌流免疫吸附治疗重症肌无力的实验研究[D];天津医科大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王海涛;生物镁合金的生物相容性研究[D];郑州大学;2010年
2 马群;壳聚糖基角膜内皮组织工程载体支架的制备及性能评价[D];中国海洋大学;2010年
3 韩蓉;聚丙烯缝合线的生物安全性评价[D];苏州大学;2010年
4 薛正翔;基于RGD-蛛丝蛋白复合纳米纤维构建小直径血管支架的研究[D];福建师范大学;2010年
5 尹刚;壳聚糖止血粉止血作用的实验研究[D];第二军医大学;2011年
6 陈刚;硫酸长春新碱缓释制剂PLGA-VCR的SGC7901细胞毒性及给药方式大鼠实验研究[D];兰州大学;2011年
7 吴景景;牙周组织工程用玉米醇溶蛋白多孔支架的制备及性能研究[D];河北医科大学;2011年
8 戴勇;抗生素骨水泥间置器二期翻修治疗人工髋关节感染[D];安徽医科大学;2011年
9 黄波涛;5-氟尿嘧啶-Fe/Fe_3O_4磁性脂质体的制备、表征及体外抑瘤作用研究[D];南京医科大学;2011年
10 李晓霞;国产无机三氧化物聚合物的生物相容性研究[D];重庆医科大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 马瑞,朱敏,刘正;血链菌死菌在生物膜再形成中的作用观察[J];上海口腔医学;2002年01期
2 万昌秀,段友容,张尔永,吴刚,冉均国,黄云超,乐以伦;LGDP改性人工心瓣材料抗细菌粘附的研究[J];生物医学工程学杂志;1999年04期
3 高亚萍,杨光,丁红梅,柳川,沈倍奋,邵宁生;TRAP蛋白的抗体制备和初步应用[J];生物技术通讯;2004年05期
4 郝立波,韩黎,王岩,周勇刚,王继芳,孟玉芬;髋关节置换后感染的微生物学分析和生物被膜研究[J];微生物学通报;2005年04期
5 奚廷斐;医疗器械生物学评价(二)[J];中国医疗器械信息;1999年04期
6 奚廷斐;医疗器械生物学评价(三)[J];中国医疗器械信息;1999年05期
7 奚廷斐;医疗器械生物学评价[J];中国医疗器械信息;1999年03期
8 王岩,郝立波,周勇刚,李静东,王继芳,唐佩福,黄鹏;人工髋关节置换术后感染的临床经验分析[J];中华外科杂志;2005年20期
9 李彤,庄辉;细菌生物膜的研究进展[J];中华微生物学和免疫学杂志;2002年03期
10 郝立波,周勇刚,王岩,王继芳,徐学蕊;37例人工关节感染的细菌学分析[J];中华医院感染学杂志;2004年12期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 董成亚;马小彤;;生物被膜分散方式的研究进展[J];微生物学通报;2005年06期
2 柏宏坚,徐卫;细菌生物被膜及相关感染[J];国外医学.呼吸系统分册;2001年02期
3 孔晋亮;陈一强;;细菌生物被膜相关感染的防治[J];内科;2007年01期
4 范晓云;孙旭群;王忠信;;下呼吸道葡萄球菌感染的耐药性分析和治疗对策[J];安徽医药;2008年06期
5 汤佩莲;陈求刚;;门诊和住院病人葡萄球菌感染和耐药性分析[J];中国热带医学;2006年07期
6 唐俊妮;周锐;王红宁;曾志光;;附属基因调节子在葡萄球菌生物被膜形成与感染中的作用[J];中南大学学报(医学版);2008年11期
7 刘明德;张邦燮;田洪明;史长宁;;葡萄球菌感染的临床分布及其耐药性分析[J];中华医院感染学杂志;1992年01期
8 张小斌;郝立波;王继芳;;人工关节生物被膜感染的诊断研究进展[J];国际骨科学杂志;2007年06期
9 李传杰;;夫西地酸预防和治疗葡萄球菌感染[J];医学综述;2008年16期
10 佟金平;王镇山;苗姝;王燕;王惠娟;薛欣;田惠媛;;磷霉素对葡萄球菌生物被膜的抑制作用[J];抗感染药学;2009年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 贾伟;赵志军;杨晓燕;魏军;;葡萄球菌对克林霉素诱导耐药表型及基因型检测研究[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年
2 伍清林;金兰梅;邓长林;周正凯;花雯;徐蕾;徐雪;宦蕴军;;动物园部分动物舍内外环境中常见病原菌的调查[A];畜牧业环境、生态、安全生产与管理——2010年家畜环境与生态学术研讨会论文集[C];2010年
3 储开建;赵良;;重症监护病房葡萄球菌医院感染比较分析[A];中华医学会急诊分会第五届全国危重病学术交流会论文汇编[C];2004年
4 胡慧霞;李艳;吴青;汪明;;182株临床分离葡萄球菌分布及耐药性分析[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
5 刘军辉;董晓慧;徐纪茹;楚雍烈;梅龙;;葡萄球菌耐药性的研究及MRSA多态性分析[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
6 李万华;张泓;孔菁;王春;孙燕;;儿童感染葡萄球菌的耐药性及红霉素和克林霉素的耐药表型[A];中华医学会第十四次全国儿科学术会议论文汇编[C];2006年
7 梁自乾;黎洪棉;孙秀锋;;南宁地区烧伤病房葡萄球菌的感染分析与对策[A];第四届全国烧伤救治专题研讨会烧伤感染救治新进展论文汇编[C];2006年
8 张冰;邵路;;肉鸡大肠杆菌和葡萄球菌混合感染的诊治[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(下)[C];2003年
9 覃金爱;朱莲娜;梁宏洁;郭世辉;农加根;钟品玲;韦惠茹;;综合性医院葡萄球菌耐药监测分析[A];中华医院管理学会第十二届全国医院感染管理学术年会论文汇编[C];2005年
10 杨辉红;郑霞;韩琴玲;;葡萄球菌耐药性监测[A];中国水利电力医学科学技术学会2007年内科、儿科学术交流会暨宜昌市医学会血液疾病诊治技术提高班论文汇编[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 徐敏;葡萄球菌能起消炎作用[N];解放日报;2010年
2 迪迪;科学家破译葡萄球菌的遗传密码[N];中国医药报;2001年
3 东辰;关键的葡萄球菌基因被确定[N];中国高新技术产业导报;2001年
4 高天;破解葡萄球菌抗药性之谜[N];中国医药报;2002年
5 莫云 江天;成堆成串的葡萄球菌[N];大众卫生报;2003年
6 禾子;警惕外来毒草祸害国内植物[N];上海科技报;2003年
7 茅理翔;企业应警惕感染亿元病[N];厂长经理日报;2001年
8 徐青;国产矫形内植物 让更多“罗锅”患儿挺直腰杆[N];人民日报;2007年
9 北京朝阳医院 张洪玉教授;生物被膜病在作怪[N];健康报;2000年
10 劳海燕;纳米控释:好![N];医药经济报;2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张小斌;聚乳酸聚乙醇酸/RNAⅢ抑制肽缓释微球的制备和预防骨科内植物葡萄球菌感染的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2008年
2 邢庆昌;RNAⅢ抑制肽防治骨科内植物葡萄球菌感染的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2007年
3 徐振波;糖生物安全中葡萄球菌生物被膜行为的致毒及耐药分子机制研究[D];华南理工大学;2011年
4 李焕新;聚乙烯表面生物被膜的形成及其抑制[D];中国科学院研究生院(理化技术研究所);2009年
5 徐洋;表面改性的纳米羟基磷灰石/PLGA复合材料的制备及成骨活性实验研究[D];吉林大学;2010年
6 戴文达;新型结构PLGA/胶原三维可降解复合材料用于软骨再生的效果研究[D];复旦大学;2010年
7 韩瑞玲;鱼精蛋白包覆PLGA纳米粒用于疫苗载体的初步研究[D];华中科技大学;2010年
8 刘福娟;聚乳酸/乙醇酸共聚物(PLGA)仿生细胞外基质的制备、表征及其与蛋白界面交互作用的研究[D];东华大学;2010年
9 汪洋;猪链球菌生物被膜形成及致病机理研究[D];南京农业大学;2011年
10 孔晋亮;氨溴索对铜绿假单胞菌生物被膜作用的体外和体内研究[D];广西医科大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 许尧祥;复合壳聚糖微球PLGA支架的制备及其对蛋白缓释作用的实验研究[D];青岛大学;2010年
2 季培红;PLGA-PLGA/BG微球双层修复支架材料的研究[D];华南理工大学;2010年
3 常丽云;堆型艾美耳球虫3-1E重组质粒PLGA微球包被技术研究[D];河北农业大学;2011年
4 张基昌;新型冠脉可降解支架材料PLGA,PLGA-PEG与兔血管平滑肌细胞相容性的研究[D];吉林大学;2004年
5 于玮洁;聚乳酸—羟基乙酸(PLGA)网作为组织工程真皮替代物骨架的研究[D];浙江大学;2010年
6 李忠义;PLGA-HA复合支架与异体骨体外细胞相容性的对比实验研究[D];中国医科大学;2010年
7 谭羽莹;利用表面改性纳米羟基磷灰石/PLGA材料构建组织工程化骨的实验研究[D];吉林大学;2011年
8 李丹丹;PLGA纳米微球的制备及其作为基因药物递送载体的研究[D];北京交通大学;2011年
9 高飞艳;生物可降解微球PLGA疫苗运输载体研究[D];兰州大学;2011年
10 林海淋;GFP基因修饰的大鼠骨髓间充质干细胞复合PLGA的形态学观察[D];福建医科大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026