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《第三军医大学》 2012年
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氯离子通道蛋白-1(CLIC1)在结肠癌转移中的作用及机制研究

王攀  
【摘要】:背景及目的 结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤,其治疗目前仍以手术为主。虽然肿瘤被完全切除,但术后仍可能发生播散性转移,术后5年生存率较低,约50%,近半数病例术后2年出现肿瘤的复发和转移。氯离子通道蛋白-1(Chloride intracellular channel1, CLIC1)是新近发现的一种离子通道蛋白,它属于氯通道蛋白家族中的一种,最近研究表明CLIC1在肝癌、胆囊癌和胃癌等肿瘤组织中高表达,并与胆囊癌及胃癌的转移相关,在结直肠癌中也检测到CLIC1的高表达,但是CLIC1是否与结直肠癌的转移有关未作相关研究。因此本课题从以下三个方面对CLIC1与结肠癌的转移作一初步研究:(1)CLIC1在结肠癌组织及癌旁组织中的表达有无差异,CLIC1的表达结肠癌患者与患者的性别、年龄、肿瘤大小、有无淋巴结转移及TNM分期等是否有关;(2)CLIC1能否通过调控性容积下降(RVD)介导结肠癌的转移;(3)CLIC1在缺氧-再加氧条件下与结肠癌转移及其机制,从而为结肠癌的防治提供新的思路和方法。 研究方法与结果 第一部分CLIC1mRNA及蛋白在结肠癌表达及临床意义 方法:收集2011年1-6月本院手术切除的54例结肠癌和相应癌旁组织(距肿瘤边缘>5cm)标本。采用逆转录RT-PCR检测CLIC1mRNA在结肠癌组织及相应癌旁组织中的表达情况,免疫组化检测CLIC1蛋白在结肠癌组织的表达。比较CLIC1mRNA在结肠癌及癌旁组织的表达差异,分析CLIC1蛋白的表达与患者年龄、性别、肿瘤的大小、部位、分化程度、淋巴结转移及TNM分期等方面的关系。结果:CLIC1mRNA在54例患者癌组织中表达的阳性率为85.18%(46/54);在相应癌旁组织中表达的阳性率为90.74%(49/54),两者CLIC1mRNA的阳性表达率之间比较无明显差异(P0.05)。CLIC1mRNA在结肠癌及癌旁组织中的扩增水平别为0.6576±0.043和0.2808±0.027,两者比较P0.01。结肠癌组织中CLIC1蛋白的表达水平高于癌旁组织,CLIC1蛋白表达在患者肿瘤的浸润程度(P0.05)和有无淋巴转移(P0.05)存在差异;在TNM分期(P0.01)差异有显著性;而CLIC1蛋白表达在患者的年龄、性别、肿瘤的大小、部位、分化程度方面无明显差异(P0.05)。 第二部分CLIC1介导RVD促进结肠癌迁移及侵袭 方法:我们用人结肠癌细胞株LOVO和HT29作为细胞模型来研究氯离子通道蛋白-1(CLIC1)在结肠癌转移中的作用。用低渗液分别刺激诱导LOVO和HT29细胞的调控性细胞容积下降(RVD)过程,比较两者RVD的差异;然后CLIC1特异性抑制剂IAA94观察对LOVO和HT29细胞RVD的影响。分别采用CLIC1特异性抑制剂IAA94和CLIC1SiRNA转染,研究它们对结肠癌细胞迁移及侵袭的影响。通过RT-PCR、Western Blot及细胞免疫荧光检测CLIC1mRNA及其蛋白的表达。结果:当两种细胞暴露于低渗溶液时,高转移潜能的LOVO和低转移潜能的HT29细胞细胞,与在等渗溶液中比较细胞容积分别增加45.6±1.8%(P 0.01)和46.8±2.3%(P 0.01)。在肿胀高峰后,细胞容积逐渐下降。LOVO细胞标准化细胞容积从峰值145.6±1.8%(低渗5分钟),下降至最小值109.8±3.0%(低渗17分钟)(P 0.01);HT29细胞标准化细胞容积,从峰值146.8±2.3%(低渗5分钟),在低渗16分钟下降至最小值120.5±2.1%(低渗16分钟)(P 0.01)。HT29和LOVO细胞的RVD值分别为61.4±2.2%和81.09±1.9%,两者比较差异有显著性(P 0.01)。特异的氯离子通道蛋白-1阻滞剂IAA94(20或40μmol/L)可抑制结肠癌细胞的RVD、迁移和侵袭能力。这些效应呈剂量依赖性。小RNA(SiRNA)干扰下调CLIC1的表达亦可抑制LOVO和HT29细胞的迁移和侵袭能力。CLIC1蛋白均主要表达在两种类型细胞的细胞膜,表明可发挥氯离子通道功能;与HT29细胞相比,CLIC1mRNA和蛋白的表达在LOVO细胞均高表达(P 0.01)。氯离子通道蛋白-1特异阻滞剂IAA94(20或40μmol/L)对两种细胞的CLIC1mRNA和蛋白表达水平均无明显的影响。 第三部分CLIC1通过ROS/ERK信号通路介导结肠癌LOVO细胞的迁移及侵袭 方法:缺氧-再加氧(H-R)培养处理人结肠癌LOVO细胞,荧光探针DCF-DA检测检测细胞内活性氧(ROS)水平,伤口愈合及Transwell细胞侵袭试验分别检测对LOVO细胞迁移及侵袭的影响。NADPH氧化酶抑制剂(DPI)、抗氧化剂(NAC)、ERK抑制剂(PD98059)及氯离子通道蛋白-1抑制剂(IAA94)分别处理H-R条件下LOVO细胞,检测对细胞ROS产生、迁移及侵袭的影响,Western blot检对ERK、p-ERK、MMP-2及MMP-9蛋白表达的影响。结果:与常氧培养组(N)比较,H-R处理后LOVO细胞内的ROS明显提高(P 0.01),细胞的迁移及侵袭能力明显增强(分别P 0.05,P 0.01), p-ERK、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显上调。与H-R组比较,DPI(15μmol/L)组; NAC(30mmol/L)组; PD98059(50μmol/L)组或IAA94(20和40μmol/L)组细胞ROS产生、迁移及侵袭能力明显减弱(P 0.01), p-ERK、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平亦明显减少。 全文结论 (1)CLIC1mRNA及其蛋白在结肠癌组织中高表达,CLIC1蛋白表达在肿瘤的浸润程度、有无淋巴转移和TNM分期方面存在显著差异;而在患者的年龄、性别、肿瘤的大小、部位、分化程度方面差异无显著性。(2)RVD与结肠癌细胞的转移潜能有关;CLIC1特异性抑制剂IAA94抑制结肠癌LOVO及HT29细胞的RVD、迁移及侵袭;CLIC1SiRNA转染两种细胞亦可抑制结肠癌细胞的迁移及侵袭能力;CLIC1可通过调控结肠癌细胞的RVD介导结肠癌的转移。(3)H-R可通过提高细胞内的ROS产生促进结肠癌的迁移及侵袭能力;CLIC1可通过ROS/ERK信号途径调控结肠癌LOVO细胞的迁移及侵袭。
【学位授予单位】:第三军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R735.35

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 芦曙辉,王玉琦;细胞迁移机制的研究进展[J];中国临床医学;2003年06期
2 王晓琴;王振华;张波;;过氧化氢与肿瘤发生发展的关系[J];时珍国医国药;2011年07期
3 李卫东;姚庆娟;刘刚;刘天舒;朱理玮;;结直肠癌VEGF和MMP-9基因的表达[J];中国肿瘤临床;2008年13期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王攀;张超;刘涛;崔浩;;CLIC-1 mRNA及蛋白在结肠癌的表达及临床意义[J];第三军医大学学报;2011年22期
2 张娟;陈旻静;王大伟;刘林嶓;王喜梅;郭丽丽;王琰;;组织蛋白酶D和基质金属蛋白酶-9在皮肤恶性黑色素瘤中的表达[J];第三军医大学学报;2012年10期
3 王立群;陈唐葶;蔡颖谦;薛翔;周翔;金春华;;Na~+-K~+-ATPase活性降低在LPS诱导大鼠心肌细胞肥大中的作用[J];南方医科大学学报;2010年09期
4 陈勇,蔡继业,邢少璟,张美英;多种肿瘤细胞表面超微结构的原子力显微镜观察及药物对细胞膜表面超微结构影响的初步研究[J];电子显微学报;2003年02期
5 孙晓宏;吕红博;李卉;尹娜;李慧武;庞作良;;MMP-9和TIMP-1 mRNA在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其意义[J];吉林大学学报(医学版);2013年06期
6 尚培中;南润玲;谷化平;;基质金属蛋白酶-9在晚期直肠癌组织中的表达及其临床意义[J];解放军医药杂志;2011年03期
7 王琰;陈旻静;张娟;王大伟;;皮肤恶性黑色素瘤组织中Kiss-1和MMP-9蛋白的表达[J];郑州大学学报(医学版);2012年04期
8 ;Atomic force microscopy in cell biology[J];Chinese Science Bulletin;2005年14期
9 刘金星;孙兴旺;;MMP-9基因多态性与胃肠道肿瘤发生发展中的作用研究进展[J];西南军医;2010年06期
10 鲁哲学,张志凌,庞代文;原子力显微镜技术及其在细胞生物学中的应用[J];科学通报;2005年12期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 陈勇;蔡继业;邢少璟;张美英;;多种肿瘤细胞表面超微结构的原子力显微镜观察及药物对细胞膜表面超微结构影响的初步研究[A];全国第七届扫描隧道显微学学术会议(STM'7)论文集(一)[C];2002年
中国博士学位论文全文数据库 前9条
1 刘颖;细胞与亚细胞层面上对稳恒磁场—抗癌药物联合效应的AFM研究[D];陕西师范大学;2011年
2 尉建锋;电压依赖性钾通道Kv2.1增加粘着斑激酶磷酸化调控肿瘤细胞粘附和迁移[D];浙江大学;2006年
3 张文松;氯离子通道ClC-2在人视网膜色素上皮细胞增殖、迁移中的作用及对PVR形成的影响[D];吉林大学;2007年
4 刘琳云;钾离子通道在B-16黑素肿瘤细胞和大鼠小脑颗粒细胞迁移中的作用研究[D];复旦大学;2007年
5 刘广源;运用原子力显微术磁驱动模式研究骨关节炎软骨细胞生物力学特性的改变[D];中国协和医科大学;2007年
6 诸葛宇征;Rac1基因对人纤维肉瘤HT1080细胞侵袭I型胶原蛋白屏障的影响及机制研究[D];大连医科大学;2008年
7 李红蕾;大鼠肝再生相关基因表达模式和作用分析[D];新疆大学;2008年
8 宋伟;RNAi抑制Snail表达对于胃癌细胞上皮—间充质转化以及体外侵袭的研究[D];华中科技大学;2009年
9 范玉莹;人参果胶对细胞迁移的影响及其机理研究[D];东北师范大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张明;胞外蛋白酶抑制剂基因expi对大鼠肝再生的作用研究[D];河南师范大学;2010年
2 朱小宝;结直肠癌组织中Smad4、MMP-9的表达及对微血管生成和肿瘤转移的影响[D];桂林医学院;2010年
3 刘金星;MMP-9基因多态性与结直肠癌相关性研究[D];泸州医学院;2011年
4 崔发强;Gli1和VEGF蛋白在大肠癌组织中的表达及临床意义[D];重庆医科大学;2011年
5 刘彩胜;原子力显微镜对玉米黑粉菌及蛋白分子的研究[D];南昌大学;2011年
6 罗兵锋;siRNA沉默类肝素酶基因的表达对人前列腺癌细胞恶性生物行为学的影响[D];华中科技大学;2011年
7 董冉冉;化学修饰微型电极在毛细管电泳中的应用研究[D];山东师范大学;2012年
8 蒋霞;海马神经元亚细胞结构及自由基致损伤的原子力显微技术研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年
9 金容;原子力显微镜对核酸的表征和血管生成素与核酸识体相互作用的研究[D];湖南大学;2006年
10 徐彦芳;药物作用后细胞表面超微结构的AFM观察[D];暨南大学;2006年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 李卫东 ,朱理玮 ,王鹏志;AP-1信号转导通路与肿瘤转移[J];天津医科大学学报;2005年02期
2 辛华,郑雅娟;肿瘤细胞侵袭及血行转移过程[J];中国肿瘤临床;2004年09期
3 陈星;任虹平;伊铁忠;糜若然;瞿全新;郑曙民;郗颜凤;连进;连争;;VEGF-C MMP9及TIMP-1在宫颈癌组织中的表达及临床意义[J];中国肿瘤临床;2007年07期
4 李卫东,王鹏志,朱理玮,陈庆良,邱宇杰;大肠癌C-myc基因转录水平及细胞动力学研究[J];中华普通外科杂志;2001年06期
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