收藏本站
《第三军医大学》 2013年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

PI3K/AKT/mTOR通路调控CA916798:CA916798诱导肺癌顺铂耐药的机制研究

王宇亮  
【摘要】:背景: 肺癌细胞对化疗的耐受是肺癌患者治疗失败的主要原因之一。在目前所用的肺癌治疗方案中,顺铂是最常用的一线化疗药物,它的主要作用机制是与DNA形成加合物,抑制细胞转录及翻译,促使肿瘤细胞凋亡。近年来的研究表明:肺癌易对顺铂产生耐药,导致治疗失败,是目前肺癌研究的热点之一;其主要机制尚未完全阐明。 近年来的研究表明:PI3K/AKT通路在肿瘤顺铂耐药过程中发挥了重要作用。AKT1过表达导致肺癌细胞对顺铂耐药, AKT1表达的抑制可以逆转肺腺癌多药耐药(MDR)细胞株A549/CDDP的顺铂耐药性。对其机制的研究则表明:AKT1通过mTOR-P70S6K1信号途径诱导肺癌细胞对顺铂耐药。 CA916798是我们通过消减抑制杂交(Suppression subtractive hybridization,SSH)技术在人肺腺癌MDR细胞系SPC-A-1/CDDP中发现的肺癌耐药相关基因。CA916798的过表达导致对顺铂敏感的小细胞肺癌细胞株H446对顺铂耐药:顺铂作用后,NCI-H446/CA916798细胞与空载体转染组细胞比较,生长增殖速度加快,细胞凋亡率下降,对多种抗肿瘤药具有抗药性。可以看出,与AKT1通路相似,CA916798也具有通过抑制药物诱导的凋亡进而诱导肿瘤细胞耐药的作用。由此我们推测两者在体内存在相互作用的可能。研究两者之间的关系无疑有助于深入了解CA916798诱导肺癌细胞顺铂耐药的作用机制。 生物信息学预测显示:CA916798蛋白可能包含1个硫酸酪氨酸位点、3个蛋白激酶C磷酸化位点和3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,提示该蛋白可能与信号转导有关。在PI3K-AKT-mTOR-P70S6K1通路中,除PI3K外,其余3个均是丝、苏氨酸激酶,它们被激活后均是通过对含有丝、苏氨酸残基的底物磷酸化而发挥作用。推测肺癌耐药相关基因CA916798可能是AKT信号通路作用的底物或靶点。但由于该蛋白与其它已知蛋白无同源性,我们对其所知甚少,不能排除其作为PI3K/AKT通路上游信号发挥作用的可能。为此,本研究试图利用人肺腺癌A549细胞株观察抑制CA916798对PI3K/AKT/mTOR通路主要成员表达的影响,同时观察抑制或激活PI3K/AKT/mTOR通路对CA916798的影响,从正反两个方面初步探讨两者之间的关系。 目的: 观察CA916798与PI3K/AKT/mTOR通路之间是否存在相互作用并初步探讨具体的作用方式,为进一步研究CA916798诱导肺癌顺铂耐药的机制并寻找新的逆转耐药方法提供基础。 方法: (1)观察对比耐化疗与对化疗敏感的肿瘤组织标本中CA916798、P-AKT、P-mTOR表达情况。 (2)免疫共沉淀及免疫双荧光实验观测A549和A549/CDDP细胞系中CA916798、P-AKT1结合及共同分布的情况,初步探讨两者之间的关联与肺癌顺铂耐药的联系。 (3)建立持续激活或抑制AKT1表达的A549和A549/CDDP细胞系,观测CA916798、AKT1、mTOR mRNA及蛋白表达(包括总蛋白和磷酸化蛋白)的变化。 (4)在分别抑制PI3K、CA916798、mTORC1/2表达的情况下,同上观察CA916798、AKT1、mTOR的mRNA及蛋白水平表达变化。 结果: (1)CA916798、P-AKT、P-mTOR在耐化疗患者肺癌病理标本中表达均显著高于对化疗敏感的患者,三者具有相同的变化趋势。 (2)CA916798与P-AKT1在体内存在结合,且两者的结合在顺铂耐药的肺腺癌细胞株A549/CDDP中显著强于普通亲代A549细胞系。 (3)抑制P-AKT1(AKT1-K179M、AKT1-siRNA、LY294002)均显著下调了A549、A549/CDDP细胞系中CA916798mRNA及蛋白的表达水平。而P-AKT1持续激活则显著增加了A549、A549/CDDP细胞系中CA916798mRNA及蛋白的表达水平。 (4)抑制mTORC1显著抑制了A549、A549/CDDP细胞的CA916798表达;抑制mTORC2(Rictor-siRNA)后亦导致A549、A549/CDDP细胞CA916798mRNA及蛋白水平的表达显著下调。 (5)抑制CA916798对A549、A549/CDDP细胞PI3K/AKT通路主要成员mRNA及蛋白的表达水平无显著影响。 结论: (1)CA916798是PI3K/AKT/mTOR通路下游靶点。 (2)PI3K/AKT/mTOR通路可能在转录水平上调控CA916798,这可能是CA916798诱导肺癌顺铂耐药发生的重要机制之一。
【学位授予单位】:第三军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:R734.2

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前5条
1 周向东,刘凌志,钱桂生,黄桂君,陈杰;一条新的人肺腺癌耐药相关基因全长cDNA片段的克隆及序列分析[J];癌症;2002年04期
2 王海晶;杨和平;周向东;;MDR相关新基因CA916798真核表达载体的构建及其对H446细胞增殖的影响[J];第三军医大学学报;2007年24期
3 王海晶;杨和平;周向东;;RNA干扰CA916798基因真核表达载体的构建与鉴定[J];第三军医大学学报;2008年01期
4 陈杰,白春学,钱桂生,黄桂君;A549/CDDP多药耐药细胞系的建立[J];中国癌症杂志;2003年02期
5 刘金;余江南;徐希明;;奥沙利铂新剂型与新制剂研究[J];江苏大学学报(医学版);2009年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘凌志,钱桂生,周向东;肺癌耐药相关基因在肺癌组织和肺癌细胞株中的表达[J];癌症;2003年02期
2 余时沧;钱桂生;李玉英;陆卫忠;李瑾;黄桂君;;线粒体靶向MPG基因重组体对人非小细胞肺癌多药耐药细胞A549/DDP增殖的抑制作用[J];癌症;2006年04期
3 王海晶;杨和平;周向东;;MDR相关新基因CA916798真核表达载体的构建及其对H446细胞增殖的影响[J];第三军医大学学报;2007年24期
4 王海晶;杨和平;周向东;;RNA干扰CA916798基因真核表达载体的构建与鉴定[J];第三军医大学学报;2008年01期
5 李学军;杨和平;周向东;;肺腺癌耐药相关基因BC006151原核表达载体的构建及蛋白表达[J];中国肺癌杂志;2008年03期
6 亓占中;王宇亮;周向东;;CA916798基因通过PI3K/AKT/mTOR通路参与顺铂耐药的机制分析[J];南方医科大学学报;2012年09期
7 祝冰晶;王宇亮;罗虎;周向东;;CA916798基因通过PI3K/AKT通路参与肺癌顺铂耐药[J];第三军医大学学报;2013年07期
8 王健;吴爱东;张红雁;钱立庭;;前列腺癌调强适形放疗的临床疗效和副反应分析[J];安徽卫生职业技术学院学报;2013年05期
9 白皓;韩宝惠;;手术在非小细胞肺癌单发脑转移治疗中的作用分析[J];中国肺癌杂志;2013年12期
10 许伟;位云艳;谭瑶曦;徐玮;程雁;吴剑卿;;干细胞转录因子Sox2在肺癌中的表达和意义[J];中国肺癌杂志;2013年11期
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 侯力;高低淋巴道转移力小鼠肝癌细胞间抑制性消减杂交文库的建立和筛选[D];大连医科大学;2003年
2 崔晓楠;高低淋巴道转移力小鼠肝癌细胞间抑制性消减杂交文库的建立和筛选[D];大连医科大学;2004年
3 余时沧;缺氧增强型线粒体靶向MPG表达体系的建立及其对肺腺癌多药耐药细胞的作用[D];第三军医大学;2006年
4 梁锐;个旧矿粉诱导支气管上皮转化细胞差异表达基因的克隆和鉴定[D];昆明医学院;2007年
5 曹立明;人肺腺癌细胞耐顺铂机制的蛋白质组学研究[D];中南大学;2008年
6 王海晶;CA916798基因在顺铂诱导的肺癌多药耐药中的作用研究[D];第三军医大学;2008年
7 蒋湘;卵巢癌铂类耐药标记蛋白Annexin A3对临床化疗耐药预测作用的前瞻性研究[D];北京协和医学院;2013年
8 唐春兰;SHP2在顺铂诱导的肺癌多药耐药中的作用及其分子机制的初步研究[D];第三军医大学;2013年
9 崔巍;肝细胞肝癌中硫氧还蛋白调控缺氧诱导因子-2α的机制研究[D];天津医科大学;2013年
10 李宝玉;hTERT启动子调控腺相关病毒介导的PE38KDEL基因治疗胰腺癌的实验研究[D];天津医科大学;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 奚文辉;MT1基因转染永生化内蒙古绒山羊皮肤成纤维细胞的研究[D];内蒙古农业大学;2011年
2 李昆霖;两条新肺腺癌多药耐药相关基因cDNA片段在肿瘤组织中表达的研究[D];第三军医大学;2003年
3 左云;非小细胞肺癌多药耐药及其逆转研究[D];苏州大学;2005年
4 林雯;耐顺铂人鼻咽癌细胞系HNE1/CDDP的建立及其耐药与凋亡关系的研究[D];汕头大学;2006年
5 殷俊;低频脉冲电场逆转MCF-7/ADR对HHT和VCR耐药性的研究[D];华东师范大学;2007年
6 王书侠;分化抑制因子3对顺铂耐药株A549/DDP细胞凋亡和顺铂敏感性影响的研究[D];江苏大学;2009年
7 杨美玲;转过表达和低表达胰岛素样生长因子Ⅰ基因牛成纤维细胞系的制备[D];内蒙古大学;2009年
8 祁梅芳;奥沙利铂长循环脂质体的研制及药物动力学研究[D];武汉理工大学;2012年
9 谢曜爵;CIK细胞对肺腺癌A549/DDP细胞株的影响观察[D];遵义医学院;2012年
10 亓占中;CA916798基因通过PI3K/AKT/mTOR通路参与顺铂耐药的机制研究[D];第三军医大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈杰,钱桂生,黄桂君,熊玮,李靖;肺腺癌多药耐药细胞特异表达基因的克隆与鉴定[J];癌症;2001年04期
2 周向东,刘凌志,钱桂生,黄桂君,陈杰;一条新的人肺腺癌耐药相关基因全长cDNA片段的克隆及序列分析[J];癌症;2002年04期
3 刘凌志,钱桂生,周向东;肺癌耐药相关基因在肺癌组织和肺癌细胞株中的表达[J];癌症;2003年02期
4 王梅;葛明建;;荧光定量RT-PCR法监测肺癌患者化疗前后外周血淋巴细胞mdr1 mRNA的变化[J];第三军医大学学报;2006年19期
5 周向东;钱桂生;刘凌志;;采用基因芯片技术筛选人小细胞肺癌SH77/CDDP多药耐药相关基因表达谱的研究[J];第三军医大学学报;2007年04期
6 王海晶;杨和平;周向东;;MDR相关新基因CA916798真核表达载体的构建及其对H446细胞增殖的影响[J];第三军医大学学报;2007年24期
7 胡义德,钱桂生,陈维中,肖桃元;人肺腺癌A_(549)多重抗药细胞株生物学特性变化[J];第三军医大学学报;1997年05期
8 李羲,郭先健,钱桂生,黄桂君;人肺腺癌多药抗药细胞系LC-3/CDDP细胞周期及DNA含量变化[J];河南肿瘤学杂志;1997年02期
9 姬明丽;宋晓荣;千智斌;李光华;;非小细胞肺癌组织Bcl-2蛋白的表达和多药耐药检测[J];郑州大学学报(医学版);2006年05期
10 陈杰,白春学,钱桂生,黄桂君;A549/CDDP多药耐药细胞系的建立[J];中国癌症杂志;2003年02期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 黄守国,孔北华,杨瑞芳,江森;人卵巢癌顺铂耐药细胞裸鼠腹腔转移模型的建立(英文)[J];中国现代医学杂志;2003年23期
2 侯魁元;费洪新;孙丽慧;卢勇;;白藜芦醇对人胃癌耐药细胞SGC7901/DDP及亲代细胞作用的研究[J];齐齐哈尔医学院学报;2008年02期
3 杨俊霞,汤为学;人肝癌顺铂耐药细胞系的建立及其生物学特征[J];癌症;2002年08期
4 李宏,赵丽嫣,乔新民;卵巢癌顺铂耐药细胞系的建立[J];大连医科大学学报;2001年01期
5 王华斌,郑伟;紫杉醇、顺铂对绒癌耐药细胞抑制作用的观察[J];齐齐哈尔医学院学报;2002年09期
6 李宏,赵丽嫣,张松平;卵巢癌顺铂耐药细胞系的建立及耐药机制的研究[J];中国实用妇科与产科杂志;2001年08期
7 高贵洲;王建军;石思恩;;P型铜转运ATP酶(ATP7B)在肺腺癌细胞株A549中的表达与顺铂耐药的关系[J];中国肺癌杂志;2009年04期
8 张瑞芬!100021北京,罗贤懋!100021北京,魏慧娟!100021北京;金属硫蛋白ⅡA过表达对乳腺癌细胞耐药性的影响[J];肿瘤防治研究;2001年04期
9 黄薇,李力,唐东平,陈心秋,黎丹戎;人卵巢癌顺铂耐药细胞株的建立、耐药机制的研究[J];中国癌症杂志;1998年03期
10 刘静;靡若然;王凯华;;切除修复交叉互补基因表达与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系[J];承德医学院学报;2007年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 谭国林;彭小伟;李维;褚玉敏;;顺铂逆转鼻咽癌耐药细胞对紫杉醇的耐药性[A];2010全国耳鼻咽喉头颈外科中青年学术会议论文汇编[C];2010年
2 仲建新;曹新平;王迪;张弘;丁润生;姜胜华;江枫;姚微;黄华;史锦云;;醋酸甲羟孕酮体内增强顺铂对人卵巢癌耐药细胞的抗癌作用的研究[A];中华医学会第一届全球华人妇产科学术大会暨第三次全国妇产科中青年医师学术会议论文汇编[C];2007年
3 李昆霖;吴国明;戢福云;黄桂君;;人小细胞肺癌多药耐药细胞差异表达基因的克隆研究[A];中华医学会第七次全国呼吸病学术会议暨学习班论文汇编[C];2006年
4 何一心;傅磊;林卓坤;宗建超;蔡英林;刘福森;杨纯正;栾凤君;宋增璇;;反义mdr-1寡核苷酸对耐药细胞的抑制作用[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
5 龚玉萍;叶雪石;刘霆;顾玲;;mdr1转基因单因素耐药和药物诱导的多因素耐药的比较研究[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年
6 周晓健;陈万涛;林李嵩;何荣根;;顺铂诱导Tca8113细胞凋亡及周期特异性[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年
7 吴琳;刘翠霞;孔繁斗;袁宏;张学军;谷玲;吕申;;顺铂对雌性大鼠骨代谢影响的实验研究[A];纪念卓越的人民医学家林巧稚大夫诞辰100周年——全国妇产科高级学术论坛论文集[C];2001年
8 周建华;史晓宇;白玉贤;;奈达铂联合5-FU和顺铂联合5-FU治疗晚期食道癌的近期疗效对比观察[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年
9 梁颖;陈丽昆;林勇斌;杨群英;王志强;徐光川;;紫杉醇联合顺铂每周方案治疗老年晚期非小细胞肺癌临床观察[A];第三届中国肿瘤内科大会教育集暨论文集[C];2009年
10 张文军;王莉;李红英;;薏苡仁油联合顺铂治疗恶性胸腔积液的临床研究[A];第三届中国肿瘤内科大会教育集暨论文集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 吴一福;川大建成人成骨肉瘤顺铂耐药细胞系[N];中国医药报;2006年
2 吴小川;冰片能促进顺铂通过血脑屏障[N];中国医药报;2002年
3 张伦;铂类药物的应用及市场分析[N];中国医药报;2001年
4 四川省肿瘤医院放疗科 徐珂;奈达铂化疗过敏一例[N];健康报;2005年
5 丁香园;发掘联合抗癌药物[N];健康报;2005年
6 晓艳;NT-3对抗化疗副作用[N];医药经济报;2002年
7 吴然;胃癌耐药细胞特异性结合短肽筛选成功[N];医药经济报;2006年
8 孙华君;非小细胞肺癌ERCC1蛋白主导的DNA修复与以顺铂为主的辅助化疗疗效的关系[N];医药经济报;2006年
9 ;治疗老年小细胞肺癌患者 全剂量顺铂/依托泊苷+来格司亭疗法比减量疗法更有效[N];医药经济报;2005年
10 张中桥;胃癌耐药细胞特异性结合短肽筛选成功[N];中国医药报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王宇亮;PI3K/AKT/mTOR通路调控CA916798:CA916798诱导肺癌顺铂耐药的机制研究[D];第三军医大学;2013年
2 刘丽萍;间皮素在卵巢上皮性癌诊断、病情监测中的价值评价及在顺铂耐药中的作用和机制研究[D];河北医科大学;2011年
3 石思恩;人肺腺癌细胞耐顺铂系A549/CDDP的比较蛋白组学研究[D];华中科技大学;2010年
4 金呈朦;UCHL1对卵巢癌细胞增殖、凋亡和顺铂耐药的影响及其机制研究[D];浙江大学;2013年
5 胡沙;EZH2在卵巢癌顺铂耐药中的作用及其机制研究[D];华中科技大学;2010年
6 郅克谦;nm23-H1提高顺铂化疗敏感性的实验研究[D];四川大学;2004年
7 彭小伟;顺铂逆转鼻咽癌紫杉醇耐药分子机制的初步研究[D];中南大学;2010年
8 徐玉生;TRAIL与顺铂协同诱导横纹肌肉瘤细胞凋亡的实验研究[D];浙江大学;2005年
9 阴梅云;阿克拉霉素与顺铂合用对卵巢癌细胞抑制机理研究[D];河北医科大学;2003年
10 周中军;肿瘤细胞耐药机理及其逆转的研究[D];中国协和医科大学;1993年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吴冬;细胞外信号调控激酶1/2在曲谱瑞林逆转卵巢癌OVCAR-3细胞对顺铂耐药中的作用[D];第二军医大学;2007年
2 刘津;人鼻咽癌顺铂耐药细胞系(Tw03/DDP)的建立及其与肺耐药相关蛋白的关系[D];广西医科大学;2009年
3 张文韬;人成骨肉瘤顺铂耐药细胞系的建立及生物学特性研究[D];四川大学;2006年
4 王攀;人胃癌顺铂耐药细胞系BGC-823/CDDP的建立及其耐药机制的初步研究[D];重庆医科大学;2005年
5 张珂;卵巢癌顺铂耐药靶向逆转的初步研究[D];山东大学;2005年
6 亓占中;CA916798基因通过PI3K/AKT/mTOR通路参与顺铂耐药的机制研究[D];第三军医大学;2012年
7 陈秀;凋亡相关蛋白POTE在晚期非小细胞肺癌顺铂耐药中的功能研究[D];苏州大学;2013年
8 吴翠芳;芦荟大黄素逆转人肺腺癌耐药细胞A549/DDP耐顺铂的作用及机制的初步研究[D];中南大学;2007年
9 朱振双;干扰细胞周期对HepG_2细胞顺铂耐药影响的观察[D];重庆医科大学;2012年
10 徐志渊;人鼻咽癌耐顺铂细胞系的放射敏感性研究[D];汕头大学;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026