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《第四军医大学》 2013年
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Cbl-b在丙型肝炎患者T细胞失能中的作用机制研究

刘海莉  
【摘要】:根据世界卫生组织2010年的数据,全球大约有1.7亿人感染了丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus, HCV)。感染HCV后,约有75-85%的患者进展为慢性肝炎。其中至少20%的感染者在未来20年内发展为肝硬化或肝癌[1]。在欧洲和南美洲,20-30%的肝移植患者是因感染HCV感所致[2]。目前尚无有效的HCV疫苗,注射干扰素加口服利巴韦林等治疗措施的有效性也只有50%左右,且会出现各种副作用,更重要的是我们尚未明确HCV的逃逸致病机制[3]。因此,我们必须尽可能的将其研究清楚,以便我们制定出更加有效的治疗方案。 趋化因子是一类小分子分泌性蛋白质,可吸引中性粒细胞、单核/巨噬细胞等炎性细胞移动到炎症部位,增强炎性细胞的吞噬杀伤功能,参与免疫调节和病理损伤。趋化因子C-X-C配体(chemokine C-X-C ligand, CXCL)属α趋化因子,其结构中含有保守的半胱-X-半胱(C-X-C)基序,主要激发中性粒细胞趋化性。其中,CXCL9又称为“γ干扰素诱导的单核细胞因子(monokine induced by gamma interferon,MIG)”,是T细胞趋化因子;CXCL11又称为“干扰素诱导的T细胞α趋化因子(Interferon-inducible T-cell alpha chemoattractant, I-TAC)”,结合CXCR3,对活化的T细胞、中性粒细胞和单核细胞发挥趋化作用。研究发现HCV患者血清中趋化因子CXCL9、CXCL11水平升高,可与T细胞上受体CXCR3结合后,有助于将T细胞募集至HCV病毒感染部位,发挥细胞免疫应答,有助于清除HCV病毒;且有研究证实,慢性肝炎患者CD4+T和CD8+T细胞高表达组织归巢受体(CD161),与趋化因子受体水平呈正相关,也进一步证实T细胞被趋化因子募集至肝脏。然而仍有75-85%HCV感染者发生慢性化,提示募集至肝脏中的T细胞没有发挥有效的免疫应答,将HCV病毒清除;一系列研究证实HCV感染者T细胞处于失能状态,导致T细胞失能的因素有多种,近期大量研究发现E3泛素连接酶Cbl-b是近年发现的首个直接参与T细胞活化和耐受的E3泛素连接酶。在很多感染性疾病中Cbl-b都发挥负调控作用,而目前尚未见有关Cbl-b在慢性丙型肝炎中的相关报道。因此,本实验拟通过探索Cbl-b在T细胞失能中的作用及规律,进一步阐明HCV感染时T细胞失能的机制,为抗HCV治疗提供新的思路和方法。 1.血清趋化因子CXCL9和CXCL11的检测 采取健康人和丙肝患者全血,2h内进行处理,吸取上层血清标本冻存于-80℃超低温冰箱中备用。应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清CXCL9和CXCL11。 2.外周血Cbl-b、CD28和CTLA-4的表达的检测 采取健康者和患者的外周血,分离出外周血单个核细胞(PBMC),将细胞调至5×106个/mL,参照美国Invitrogen公司的Trizol试剂说明提取总的RNA并定量。用1gRNA反转录,再加入引物用PCR试剂盒扩增目的基因。 3.Cbl-b腺病毒载体的构建和包装 将Cbl-b基因定向插入到腺病毒穿梭质粒pAV.EX1d-CMV中,获得重组质粒pAV.Ex1d-CMVCBL-B/IRES/EGFP,再转染HEK293细胞,包装腺病毒表达载体。用不同方法检测腺病毒载体。通过酶切、PCR及测序对穿梭质粒进行了鉴定。 结果: 1.健康对照组血清CXCL9、CXCL11的浓度低于慢性丙型肝炎组,差异均具有统计学意义(P0.05)。在慢性丙型肝炎组内,CXCL9和CXCL11的水平在不同HCV1b基因型组和2a基因型组之间无显著差异。CXCL9和CXCL11浓度与血清ALT水平无相关性,与HCV RNA载量也无相关性。 2.Cbl-b、CD28和CTLA-4mRNA在慢性丙型肝炎患者中较健康对照组表达升高,其中CTLA-4的升高表达具有统计学意义;在HCV lb基因型中,Cbl-b和CTLA-4mRNA水平较HCV2a基因型显著升高,差异具有统计学意义,而这三个分子与HCVRNA和ALT水平均无显著统计学意义。 3.经酶切及PCR鉴定,Cbl-b腺病毒载体构建成功,进一步研究Clb-b在HCV感染中的作用机制奠定了基础。 综上所述,Cbl-b在丙型肝炎患者T细胞失能中可能起到了负性调节作用,具体机制仍需进一步的研究和探索。
【关键词】:Cbl-b 丙型肝炎病毒 T细胞失能 发病机制
【学位授予单位】:第四军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:R512.63
【目录】:
  • 缩略语表4-6
  • 中文摘要6-9
  • Abstract9-12
  • 前言12-14
  • 文献回顾14-26
  • 实验一血清趋化因子 CXCL9 和 CXCL11 的检测26-32
  • 1 材料26-27
  • 2 方法27-29
  • 3 结果29-30
  • 4 讨论30-32
  • 实验二 PBMC 中 Cbl-b、CD28 和 CTLA-4 的表达32-38
  • 1 材料32
  • 2 方法32-35
  • 3 结果35-37
  • 4 讨论37-38
  • 实验三 含有人 Cbl-b 的重组腺病毒构建38-50
  • 1 材料38-39
  • 2 方法39-46
  • 3 结果46-48
  • 4 讨论48-50
  • 小结50-51
  • 参考文献51-63
  • 附录63-66
  • 个人简历和研究成果66-67
  • 致谢67-68

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 赵永平,白文俊,闫征,陈国强,刘士军,邓庆平,王晓峰;人磷酸二脂酶基因反义RNA重组腺病毒载体的构建[J];中华男科学杂志;2005年05期
2 刘斌;匡安仁;;MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通道的基因变异与甲状腺癌的发生发展及诊治[J];生物医学工程学杂志;2012年06期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 盛梅;张海燕;宋冬冬;邹存华;;卵巢癌细胞及组织中P38MAPK信号通路调控uPA蛋白的表达及临床意义[J];肿瘤防治研究;2015年08期
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1 张吉;Notch-1、Notch-2在甲状腺乳头状癌中的表达[D];昆明医科大学;2013年
【二级参考文献】
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1 李培建,李兵仓;一种重组腺病毒载体的扩增、纯化和病毒滴度检测方法[J];中华神经医学杂志;2002年01期
2 白文俊,侯树坤,王晓峰,闫征,何培英,邓庆平,胡小朋,管考鹏;PDE5基因反义寡脱氧核苷酸对人阴茎海绵体平滑肌细胞cNMP的影响[J];中华男科学;2002年02期
3 张岩,刘贤锡,胡海燕,耿昭,王晓明,张冰;人ODC基因第三外显子反义RNA腺病毒载体的构建[J];山东大学学报(医学版);2003年04期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张普洪,武阳丰,金水高,赵连成,李贤;个体失能调整损失年的建立和探讨[J];中华预防医学杂志;2004年02期
2 沈清;杨敬;刘立群;陈定湾;韩晓军;刘谷琮;;浙江省主要神经精神及相关疾病失能权重的评定[J];中国卫生经济;2006年07期
3 王玉环;刘艳慧;黄方超;;新疆石河子市失能老年人社会支持状况调查[J];现代预防医学;2011年12期
4 唐咏;;高龄失能老人主要照顾者心理健康与长期照护体系的建立[J];学术论坛;2012年09期
5 侯蔚蔚;王玉环;冯雅楠;刘素香;;居家非正式照护者与失能老年人生活满意度比较[J];中国老年学杂志;2013年05期
6 欧霞;彭爱珍;王洲羿;;失能老人生活质量现状及护理服务对策[J];齐鲁护理杂志;2013年03期
7 王玉环;冯雅楠;侯蔚蔚;吴复琛;;援疆汉族失能老年人及居家照护者对长期照护需求的调查研究[J];中国全科医学;2013年14期
8 冯雅楠;侯蔚蔚;吴复琛;王玉环;;援疆汉族失能老年人选择居家长期照护的原因及其影响因素[J];中国护理管理;2013年08期
9 况成云;邓平基;周尚成;陈萍;马菊华;况丽;;基于伦理学视域的失能老人照护服务体系研究[J];医学与哲学(A);2013年07期
10 仲伟爱;罗灵;;失能老人的照护对策研究——以苏州市社会福利院为例[J];中国民康医学;2013年19期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨丽华;;农村失能老人的照护问题[A];陕西老年学通讯·2012年第2期(总第90期)[C];2012年
2 王小平;;亟待建立住院老人中长期照护保障体系[A];第15届全国老年护理学术交流会议论文汇编[C];2012年
3 邢华;;我国将为失能困难老人发放护理补助[A];陕西老年学通讯·2013年第2期(总第94期)[C];2013年
4 周粤;;西安市老龄办组织召开西安市农村失能老人养老状况实地调研阶段情况座谈会[A];陕西老年学通讯(总第98期)[C];2014年
5 ;构建城市失能老人亲属照顾者社会全面支持体系之探讨[A];上海市退休职工管理研究会2013年优秀论文选集[C];2014年
6 阴忆烽;童朝阳;黄启斌;林福生;陈乐贵;杨廷松;;定量研究火灾烟气各成份对导致人失能作用的影响[A];中国药理学会毒理专业委员会第十次学术会议论文摘要汇编[C];2004年
7 罗瑞;;略阳县老龄办、老年学学会看望慰问失能老人[A];陕西老年学通讯·2013年第4期(总第96期)[C];2013年
8 王萍;;沟通交流技巧在不同失能老人中的应用[A];第七届全国老年医学学术会议暨海内外华人老年医学学术会议论文汇编[C];2004年
9 祝玉梅;;提高护理服务人员的整体水平[A];老龄产业研究文集[C];2012年
10 庄汉;;失能者长期照护的立法需求分析[A];中国法学会行政法学研究会2010年会论文集[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 陶映荃 高莎;失能老年人照护困扰中国家庭[N];工人日报;2011年
2 张传发;“失能老人护理难”里有大商机[N];中国商报;2012年
3 记者 韩雯;津城失能老人超12万[N];天津日报;2012年
4 黑龙江省齐齐哈尔市诚信失能老人护理院院长 易连军 代表;让全社会都关心失能老人[N];光明日报;2013年
5 记者 邢晓丹;让失能老人过上有尊严的晚年生活[N];中国政府采购报;2013年
6 本报记者 孙佳薇;破解失能老人养老困局[N];黑龙江日报;2013年
7 记者 陈淑华 实习生 陈凤飞 蔡秋婷;1800名特困失能老人享政府购买服务[N];泉州晚报;2013年
8 ;3600万失能老人谁照顾?[N];人民政协报;2013年
9 记者 白云婷;建立失能老人重点保障机制[N];中国人口报;2013年
10 本报记者 蒋炜宁 通讯员 陶子;老龄社会,急需提升失能老人居家医疗护理[N];宁波日报;2013年
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 罗小华;我国城市失能老人长期照护问题研究[D];西南财经大学;2014年
2 许桂莲;超抗原SEA诱导T细胞失能的分子机制研究[D];第三军医大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张云云;农村失能老人照料问题研究[D];福建师范大学;2013年
2 应超波;失能老人社区护理补贴制度研究[D];中国社会科学院研究生院;2014年
3 李振锋;生命历程视角下的失能老人研究[D];中共北京市委党校;2014年
4 王薇;失能老人机构照护体系存在的问题与对策研究[D];湖南农业大学;2014年
5 牟勇;西安市失能老人照护服务问题研究[D];广西民族大学;2015年
6 杨飞;长春市城市失能老人长期照护服务问题研究[D];长春工业大学;2015年
7 王慧;城市失能老人长期照护服务问题研究[D];湖南师范大学;2012年
8 夏伟伟;我国失能老人长期照护体系的构建[D];浙江工商大学;2013年
9 谢倩;合肥市失能老人护理服务问题研究[D];安徽大学;2013年
10 洪蕾;基于随机分析的中国老年人失能状态转移规律研究[D];浙江大学;2013年
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