收藏本站
《中国人民解放军军事医学科学院》 2017年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

大肠杆菌肠毒素在酵母菌表面的展示及其生物学特性研究

李诗语  
【摘要】:动物腹泻病是指由细菌、病毒感染或其他各种因素引起的以急性或慢性腹泻为主要特征的疾病。该病多发生于幼龄动物中,严重威胁畜牧业的健康发展。而产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxigenic escherichia coil,ETEC)又是动物腹泻的主要致病因素,ETEC可产生一种或几种肠毒素,包括热敏肠毒素(Heat-liable toxin,LT)和耐热肠毒素(Heat-stable toxin,ST),通过影响肠细胞壁的透过性,使水和电解质流向肠腔,从而导致类似人霍乱的水样腹泻的发生。ST为小分子蛋白,因其具有较好的免疫原性,常被用于疫苗研发。LT则凭借分子量大、免疫原性强等优势,常被用作黏膜免疫佐剂。微生态制剂(Probioties),是指运用微生态学原理,将益生菌及其代谢所产生的促生长物质进行特殊加工而制成的活菌制剂。畜禽微生态制剂已经逐渐成为社会的研究焦点,因为其有别于化学物质具有无毒副作用(非化学物质)、药残检测无残留、对抗生素等药物无耐受能力等优点。目前,抗生素的使用已受到严格控制,使微生态制剂广泛应用于食品,药品及保健食品等多个领域,且应用效果显著。酵母细胞表面展示技术是一种将外源靶蛋白通过信号肽引导,进而锚定在酵母细胞表面的真核表达系统。酿酒酵母菌是常用的展示载体。此项技术具有表达偏差小、展示蛋白种类多、分子数量大、筛选、纯化、活性测定方便等特点。目前,该技术已应用于多个研究领域,具有广阔的应用前景。近年来,抗生素的过度使用也给动物体和周围环境造成较高浓度的兽药残留,破坏了水及土壤等生态环境。耐药菌株的出现成为传统抗生素使用的一大障碍。因而针对特异性靶点设计安全性好、免疫原性高的新型微生态制剂已成为当前研究的热点。本课题成功建立了大肠杆菌肠毒素融合蛋白在酵母表面的展示技术,实验研究表明,构建的酿酒酵母基因工程菌不仅具有微生态调节作用,还可以有效提高机体的黏膜免疫功能,对强毒ETEC的攻击具有保护作用。1、酿酒酵母表面展示系统的建立。首先,进行ETEC所产生的三种肠毒素est A、estB及eltAB基因的克隆。采用基因定点突变的方法对estA及eltAB基因进行改造,然后以7个氨基酸的linker序列将三种肠毒素基因串联。通过双酶切、连接、转化等手段成功构建pYD1-estA-eltAB-estB重组质粒,再经电击转化的方式成功构建了EBY100/pYD1-estA-elt AB-estB酿酒酵母基因工程菌,免疫荧光检测及扫描电镜检测结果显示,estA-elt AB-estB融合蛋白成功展示在酿酒酵母菌表面。2、酿酒酵母基因工程菌对大鼠小肠上皮细胞的影响。选取4-6周龄的SPF级SD大鼠90只,雌雄各半。随机分为空白对照组、基因工程菌组及EBY100酵母菌组,每组30只。EBY100酵母菌组及基因工程菌组的灌胃浓度为107CFU/mL,每天灌胃1次,每次2m L/只,空白对照组给予同等体积的生理盐水,持续21d。此后连续3 d灌胃108 CFU/mL大肠杆菌H10407菌液,每日一次,每次4m L/只。分别于灌胃试验第7d、14d、21d及灌胃大肠杆菌菌液3d后取所需组织样本。(1)基因工程菌对小肠绒毛影响。酵母及其基因工程菌的十二指肠宽度极显著高于空白对照组(P0.01),且两实验组之间无显著差异(P0.05)。酵母基因工程菌组的十二指肠、空肠的绒毛宽度极显著高于空白对照组(P0.01),十二指肠的V/C值明显高于EBY100酵母菌组,呈现出极显著差异(P0.01),回肠及空肠的隐窝深度则显著低于于空白对照组(P0.05),绒毛长度及宽度变大,隐窝深度减小是小肠对营养物质消化吸收能力增强的表现,这也进一步证明了酿酒酵母基因工程菌对小肠绒毛的生长促进作用。从灌胃大肠杆菌后的测量结果可以看出,EBY100酿酒酵母组十二指肠、空肠及回肠的长度及V/C值呈极显著下降趋势(P0.01),隐窝深度呈现明显上升趋势,其中空肠的隐窝深度数值较灌胃前变化最大,呈现出极显著差异(P0.01)。EBY100酵母菌组绒毛长度、V/C值及较灌胃大肠杆菌之前极显著下降(P0.01),空肠的隐窝深度极显著上升(P0.01)。酵母基因工程菌组中空肠及十二指肠绒毛长度则无明显变化(P0.05);在绒毛宽度及隐窝深度方面各长度均表现出无显著变化(P0.05);十二指肠的V/C值较灌胃ETEC前无显著差异(P0.05)。ETEC攻毒后结果说明,与EBY100酵母菌相比较,酵母基因工程菌对小肠绒毛的保护作用更强。(2)粪便pH值检测。实验的0-21d期间,空白组pH值均高于实验组,并从灌胃的第14d开始,酵母及其基因工程菌组的pH值极显著低于空白对照组(P0.01),灌胃21d时差异最显著(P0.01)。灌胃ETEC后,空白对照组肠道内pH值显著升高(P0.05);EBY100酵母菌组的pH值与灌胃21d相比并无显著变化(P0.05);酵母基因工程菌组的pH值与灌胃21d相比基本无变化(P0.05)。以上结果表明,酵母基因工程菌在维持肠道内酸碱平衡方面发挥了作用。(3)大鼠肠道菌群的变化分析。从灌胃的第14d开始,各实验组肠道菌群的数量开始显著增长,21d天时呈现出极显著差异(P0.01)。其中,EBY100酵母菌组除肠球菌外肠道内的乳酸菌、双歧杆菌、梭菌及类杆菌的增长倍数均最大。当灌胃了ETEC后,酵母基因工程菌组大鼠肠道菌群数量的增长倍数极显著高于EBY100酵母菌组(P0.01),这一结果也进一步证明了酿酒酵母基因工程菌对肠道菌群的调节作用。3、酵母菌及其基因工程菌的实验动物免疫研究。(1)酵母基因工程菌对大鼠肠黏膜中SIgA含量的影响。灌胃第14d,酵母工程菌组SIgA分泌量最高,与EBY100酵母菌组及空白对照组之间均呈现极显著差异(P0.01);灌胃第21d,酵母工程菌组与EBY100酵母菌组均极显著高于空白组且两实验组之间无显著差异(P0.05)。ETEC攻毒后空白对照组与实验组的SIgA的分泌量均极显著低于攻毒前(P0.01),但酵母基因工程菌组减少的幅度最小,这说明酵母基因工程菌提高了小肠黏膜的免疫功能。(2)酵母基因工程菌对大鼠肠黏膜中细胞因子的影响。在实验初期,各实验组肠黏膜IL-2、IL-4及IFN-γ三种细胞因子含量均未发生显著变化,从灌胃第14d开始,EBY100酵母菌组及基因工程菌组各细胞因子含量显著上升(P0.05);第21d时,呈现极显著上升趋势(P0.01)。灌胃ETEC后,EBY100酵母菌组及基因工程菌组三种因子的分泌量均极显著高于21d空白对照组,其中,基因工程菌组IL-2、IL-4分泌量最高,而IFN-γ的分泌量最低,以上结果表明酵母基因工程菌有效的提高肠黏膜中IL-2、IL-4及IFN-γ的分泌量,从而提高机体免疫力。(3)酵母基因工程菌对大鼠免疫器官的影响。灌胃14d开始空白对照组及两组实验组的胸腺及脾脏系数均有所增加,其中酵母菌组增长幅度最小且明显低于基因工程菌组。灌胃ETEC后,空白组与酵母菌组数值均有所下降,而酵母基因工程菌组的数值并无明显变化,甚至有微小上升,与空白对照组形成显著差异(P0.05)。这一结果表明,酵母基因工程菌具有促进胸腺及脾脏发育的功能。(4)酵母基因工程菌对大鼠血清学指标的影响。通过对血清中ALT、AST、TG、TBILI、DBILI、GLU、CHO、ALB及TP含量的检测可以发现,在实验的前21d,各实验组的各项指标的检测结果均无显著变化,但灌胃ETEC后,各组的ALB、TP及GLU值均呈现上升趋势,但均未达到显著水平。其中,酵母基因工程菌组上升幅度最小,这一结果表明,酵母基因工程菌没有引起肝组织的损伤及血液其他指标的改变。综上所述,得出以下结论:1、成功建立了大肠杆菌肠毒素在酿酒酵母表面的展示技术,动物实验证明,所构建的工程菌对大鼠安全、无毒副作用。2、酿酒酵母基因工程菌能有效降低攻毒ETEC后的大鼠肠道pH值,可以维持肠道内酸碱平衡。3、工程菌能够调节大鼠肠道微生态的动态平衡,使肠道菌群数量呈极显著上升趋势;ETEC攻毒后工程菌发挥酵母菌的益生作用,使肠道菌群数量依然实现稳定增长。4、工程菌可以提高肠道黏膜免疫力,增加SIgA、IL-2、IL-4及IFN-γ的分泌量;当强毒ETEC侵入时,可有效保护小肠黏膜不受侵害。
【学位授予单位】:中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S852.61

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 卢晓冉;王晓旭;郑光来;李诗语;沙洲;李争;卜昭阳;程慧敏;王兴龙;;酿酒酵母及EtpA酿酒酵母基因工程菌对大鼠小肠黏膜结构的影响[J];畜牧与兽医;2016年02期
2 孙丽焕;;浅谈对微生态制剂的看法[J];北方牧业;2015年03期
3 尚沁沁;李雅丽;史艳云;付爱坤;李卫芬;余东游;;益生菌对动物肠上皮细胞免疫功能的研究进展[J];中国畜牧杂志;2014年13期
4 薛玉玲;朱宏;罗永康;王世杰;;益生菌健康功能的研究进展[J];乳业科学与技术;2014年04期
5 Melike Balikoglu-Yilmaz;Tolga Yilmaz;Sule Cetinel;Umit Taskin;Ayse Banu Esen;Muhittin Taskapili;Timur Kose;;Comparison of scanning electron microscopy findings regarding biofilm colonization with microbiological results in nasolacrimal stents for external, endoscopic and transcanalicular dacryocystorhinostomy[J];International Journal of Ophthalmology;2014年03期
6 张秀媛;袁万哲;孙继国;;产肠毒素性大肠杆菌主要毒力因子及其疫苗的研究进展[J];畜牧与兽医;2014年05期
7 李长玉;刘政江;;提高免疫力可以长寿[J];家庭医学;2013年02期
8 戴秀美;常维山;;2012年我国部分地区猪源大肠杆菌耐药性分析[J];畜禽业;2013年01期
9 贾玉臣;陈庆森;王友湘;阎亚丽;;瑞士乳杆菌对小鼠肠道黏膜免疫应答及细胞因子的影响[J];食品科学;2010年23期
10 于桂阳;;湖南省规模化猪场猪源大肠杆菌耐药性调查[J];中国猪业;2010年11期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 曾毓芳;李春华;马立新;;酵母表面展示载体系统构建及表达研究[A];中国蛋白质组学首届学术大会论文摘要集[C];2003年
2 梅学文;陈宝江;于会民;;产蛋高峰期蛋鸡消化参数变化规律的研究[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 孙慧;新型酿酒酵母表面展示系统的构建及鸡球虫EtMic2活载体疫苗的免疫保护性研究[D];山东农业大学;2014年
2 谷子林;断乳仔兔腹泻发生机制及生物活性物质的调控研究[D];东北农业大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前6条
1 魏伟;猪源产肠毒素大肠杆菌多重PCR检测方法的建立及整合子介导的耐药性分析[D];江西农业大学;2014年
2 汤飞飞;母猪妊娠后期和仔猪日粮添加酵母培养物对母猪生产性能、仔猪肠道健康及免疫机能的影响[D];南京农业大学;2012年
3 李伟;几种常用实验动物与人肠道主要菌群多样性比较[D];西南大学;2011年
4 黄玉章;黄芪多糖对奥尼罗非鱼生长性能和免疫功能的影响[D];福建农林大学;2009年
5 胡建军;K88菌毛细胞表面呈现载体的初步研究[D];石河子大学;2008年
6 王友湘;瑞士乳杆菌对小鼠肠道粘膜免疫的影响[D];天津商业大学;2008年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 沙洲;李诗语;卢晓冉;王莉;卜昭阳;王兴龙;;ST酿酒酵母基因工程菌对大鼠肠道菌群的影响[J];黑龙江畜牧兽医;2017年19期
2 尹宝英;张文娟;朱小甫;;规模猪场致病性大肠杆菌的药敏试验[J];上海畜牧兽医通讯;2017年04期
3 赵晓黎;;猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验[J];畜禽业;2017年04期
4 王泳;叶雷;贾彦;庞广昌;赵培;闫亚丽;陈庆森;;瑞士乳杆菌TS206对小鼠血脂及粪便胆汁酸水平的调控影响[J];食品科学;2017年11期
5 姜全文;;浅析绵阳地区猪大肠杆菌病防治措施[J];中国畜禽种业;2016年10期
6 赵碎巧;;益生菌联合谷氨酰胺肠内营养用于重症急性胰腺炎的效果评价[J];现代中西医结合杂志;2016年22期
7 戴青;于丽娜;张璐;韩宁宁;徐嫄;赵晖;;安普霉素的研究进展[J];中国兽药杂志;2016年07期
8 尹玉花;;早期肠内营养联合益生菌对重症急性胰腺炎患者的疗效[J];临床医药文献电子杂志;2016年18期
9 文子义;;炎症性肠炎病患者应用益生菌联合美沙拉嗪的治疗效果分析[J];中国实用医药;2016年08期
10 卢晓冉;王晓旭;郑光来;李诗语;沙洲;李争;卜昭阳;程慧敏;王兴龙;;酿酒酵母及EtpA酿酒酵母基因工程菌对大鼠小肠黏膜结构的影响[J];畜牧与兽医;2016年02期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 李诗语;大肠杆菌肠毒素在酵母菌表面的展示及其生物学特性研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2017年
2 李升和;微量元素硼对大鼠营养和毒性作用及作用机理的研究[D];华中农业大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘立杰;三株乳酸菌对小鼠肝脏抗氧化能力及肠道粘膜免疫的影响[D];内蒙古农业大学;2017年
2 范权飚;“康预”对PED免疫母猪初乳中分泌型IgA抗体水平的影响[D];福建农林大学;2017年
3 高培丽;产胞外多糖南极微生物的筛选及其胞外多糖的应用研究[D];福建农林大学;2017年
4 王亚如;豆粕替代鱼粉对花鲈生长性能和肠道健康的影响[D];集美大学;2017年
5 刘栋;野生与养殖大鲵肠道微生物多样性分析及产酶活性研究[D];陕西理工学院;2016年
6 刘乔;Lactobacillus helveticus IMAU60208高密度发酵工艺研究[D];内蒙古农业大学;2016年
7 左明开;江西猪源产ESBLs ETEC流行及质粒相关性研究[D];江西农业大学;2016年
8 王玲;半胱胺和酵母培养物对奶牛瘤胃微生物蛋白产量、产奶性能和氮排泄的影响[D];青岛农业大学;2016年
9 谢俊华;植物乳杆菌NCU116对肠道健康的影响[D];南昌大学;2016年
10 卢晓冉;大肠杆菌黏附素EtpA酵母工程菌对肠道菌群和黏膜免疫的影响[D];中国人民解放军军事医学科学院;2016年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张秀媛;袁万哲;孙继国;;产肠毒素性大肠杆菌主要毒力因子及其疫苗的研究进展[J];畜牧与兽医;2014年05期
2 杨兴友;张育华;王光西;;益生菌治疗溃疡性结肠炎研究进展[J];泸州医学院学报;2012年05期
3 朱翠;师子彪;蒋宗勇;王丽;;乳酸杆菌在调节肠道屏障功能中的作用[J];中国畜牧兽医;2012年09期
4 ;Effects of Lactobacillus plantarum on gut barrier function in experimental obstructive jaundice[J];World Journal of Gastroenterology;2012年30期
5 田晖艳;王学东;谭斌;周晓辉;;酵母在单胃动物中的作用机制及应用研究进展[J];饲料研究;2012年01期
6 谢为天;徐春厚;陈晗;;仔猪致病性大肠杆菌的分离鉴定与耐药性分析[J];广东畜牧兽医科技;2011年05期
7 于桂阳;王美玲;郑春芳;;湖南省永州市规模化猪场猪源大肠杆菌的耐药性调查[J];养猪;2011年04期
8 陈凤莲;赵武;黄红梅;覃绍敏;华俊;马玲;吴健敏;杨威;;广西中小规模猪场大肠杆菌病流行情况调查[J];中国畜牧兽医;2011年06期
9 覃开权;;湖南省规模化猪场猪源大肠杆菌的耐药性调查[J];中国动物检疫;2011年03期
10 郑新添;陈丹霞;杨小燕;;猪源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性检测[J];上海畜牧兽医通讯;2011年01期
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 肖根辉;嗜水气单胞菌临床分离株的耐药性与整合子分析[D];江西农业大学;2012年
2 田书会;酵母培养物对夏季生长育肥猪肠道微生物发酵和区系及机体免疫功能的影响[D];南京农业大学;2011年
3 张辉建;畜禽肠道大肠杆菌耐药性及整合子—基因盒检测[D];四川农业大学;2011年
4 赵永静;多重PCR检测整合子及其在分析金葡菌耐药中的作用[D];郑州大学;2011年
5 王芳;ETEC肠毒素SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立[D];西北农林科技大学;2011年
6 苏志新;鸡源禽致病性大肠杆菌分离鉴定及其毒力相关基因分布特征分析[D];南京农业大学;2011年
7 吴奎海;临床分离非发酵G-杆菌Ⅰ类整合子及ISCR1的结构研究[D];南方医科大学;2011年
8 吴利锋;济宁地区鸡源致病性大肠杆菌分离鉴定与耐药性分析[D];山东农业大学;2010年
9 姚永瑞;中药消除剂对大肠杆菌耐药性消除作用的研究[D];西南大学;2008年
10 寿军;重庆猪源大肠杆菌多重耐药性与Ⅰ型整合子的相关性研究[D];西南大学;2007年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 郭丽华;;申请工程菌专利[J];遗传工程;1981年04期
2 吴明;;遗传工程菌氧化萘[J];微生物学杂志;1985年01期
3 黄树其,陈玉涛,齐锡位,陈德元,黄美华,王小宁;G-CSF-pJGW1/pGP1-2/DH5α工程菌的系统稳定性研究[J];解放军广州医高专学报;1997年02期
4 董宇清,李荣贵,董春霞,赵进东,吴光耀;重组人白细胞介素6工程菌的表达和功能初探[J];北京大学学报(自然科学版);2000年04期
5 张艳红,廖晓全,范立强,袁勤生;重组人锰超氧化物歧化酶工程菌高效表达培养工艺的研究[J];中国药学杂志;2002年01期
6 刘晓宏,粟永萍,艾国平,王蒙,李淑蓉,王军平,程天民;诱导重组人生长激素工程菌高效表达的研究[J];第三军医大学学报;2002年07期
7 郭云萍;陶凌;李刚;任阳;王慧峰;;重组人硫氧还蛋白工程菌生物学特性稳定性的检测[J];微生物学通报;2013年08期
8 柯星;“工程菌”产生胰岛素原蛋白首次在我国获得成功[J];遗传工程;1984年01期
9 徐九丁,童葵塘;温敏工程菌的表达与调控[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;1993年02期
10 李久蒂,李永兴,董越梅,安千里,王继文,张燕,匡柏健,隋文志,卢林纲,钟鄂荣,唐颖,卢明峰,王焱,林琳;玉米联合固氮工程菌的研究[J];高技术通讯;1999年12期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 施巧琴;林峻;郑斌;温建新;翁雪清;黄祥峰;吴松刚;;L-苯丙氨酸FSP-618工程菌的构建[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2009年学术交流会论文摘要汇编[C];2009年
2 徐静;寻广新;张青文;周明;杨青芹;;棉花抗虫工程菌在棉株内的动态变化和抗虫稳定性研究[A];新世纪(首届)全国绿色环保农药技术论坛暨产品展示会论文集[C];2002年
3 赵清;刘相梅;詹杨;边疆;刘缨;林建群;颜望明;;高效抗砷喜温硫杆菌工程菌的构建[A];中国资源生物技术与糖工程学术研讨会论文集[C];2005年
4 韩金祥;王健;;重组变异葡激酶的表达、纯化和鉴定[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
5 薛晓畅;包春杰;韩苇;秦鑫;张存;曹筑荣;李维娜;赵玉红;张英起;;重组人B淋巴细胞刺激因子工程菌高密度发酵[A];2008年中国药学会学术年会暨第八届中国药师周论文集[C];2008年
6 何莉;孟冬娅;;重组工程菌pET32a-CR1-SCR15-18/BL21(DE3)[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
7 陈保立;葛鲁娜;王世立;韩金祥;;重组人骨形态发生蛋白-7工程菌的分批培养[A];山东生物化学与分子生物学会2009年学术会议论文汇编[C];2009年
8 蔡在龙;毛积芳;冯伟华;刘军华;;重组人肝脏再生增强因子工程菌发酵条件的优化研究[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
9 吴伟斌;施巧琴;郑斌;翁雪清;刘建明;庄秀榕;吴松刚;;L-苯丙氨酸工程菌关键酶基因的分子改造[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2009年学术交流会论文摘要汇编[C];2009年
10 孔祥菊;王智;王玉国;冯雁;曹淑桂;;脂肪酶工程菌的构建、表达、纯化及酶学性质的研究[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
中国重要报纸全文数据库 前3条
1 本报记者 侯曜禹;利用棉花抗虫工程菌防治棉铃虫[N];农民日报;2001年
2 记者 杜华斌;加拿大成功绘制出酵母基因图[N];科技日报;2007年
3 记者 王伟 通讯员 岳辉;对付害虫又添新的生物武器[N];广东科技报;2000年
中国博士学位论文全文数据库 前7条
1 李诗语;大肠杆菌肠毒素在酵母菌表面的展示及其生物学特性研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2017年
2 高丽丽;一步单菌发酵生产2-酮基-L-古龙酸工程菌的构建与优化[D];江南大学;2014年
3 段云霞;产核黄素工程菌B. subtilis PY的代谢工程研究[D];天津大学;2009年
4 钮利喜;工程菌生物转化D-氨基酸及其相关酶的研究[D];山西大学;2007年
5 于金龙;大肠杆菌芳香族氨基酸生物合成途径的代谢调控研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
6 何华纲;农业有害微生物的绿色控制方法研究[D];江苏大学;2012年
7 史硕博;应用系统代谢工程方法改进产核黄素枯草芽孢杆菌的研究[D];天津大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郭磊;匹诺塞林生物合成相关基因的克隆、功能鉴定及工程菌的构建[D];北京协和医学院;2015年
2 刘婷婷;高积累谷胱甘肽乳酸菌的分离、鉴定及重组工程菌的构建[D];浙江大学;2015年
3 吴风;侵袭性抗肿瘤靶向工程菌E.coli Nissle 1917 VB的构建及功能研究[D];湖南师范大学;2012年
4 华渤文;产琥珀酸大肠杆菌工程菌的构建及其发酵研究[D];湖北工业大学;2014年
5 王丹;重组海参溶菌酶工程菌发酵及表达产物纯化的研究[D];大连工业大学;2011年
6 刘天佳;过量合成5-氨基乙酰丙酸工程菌的构建[D];河北科技大学;2013年
7 张熠;小单孢工程菌构建及其功能基因研究[D];福州大学;2014年
8 孙明哲;高产耐高温酸性木聚糖酶工程菌的构建[D];天津科技大学;2015年
9 杨兴兴;工程菌技术强化脱氮及绿锈深度脱氮机制研究[D];上海大学;2016年
10 王翠艳;高表达纤维二糖水解酶Ⅱ工程菌构建及其发酵豆渣理化特性研究[D];吉林农业大学;2016年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026