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《中国人民解放军军事医学科学院》 2005年
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猪卵母细胞孤雌激活、胚胎培养和成熟过程中细胞因子作用的研究

刘珠果  
【摘要】:猪卵母细胞的体外成熟培养、成熟卵母细胞的孤雌激活和胚胎培养是胚胎生物工程技术的主要环节。研究猪卵母细胞发育的基础技术和相关机理正逐渐受到人们的关注。猪卵母细胞体外成熟培养、孤雌激活和胚胎培养条件的优化和相关机理的阐明对于体细胞核移植和转基因动物构建具有重要意义。目前,国内外在这几个方面作了相关的研究,但其研究尚不成熟,影响了我们即将开展的猪体细胞核移植和相关机理研究的开展。为此,本实验对猪卵母细胞体外成熟培养、成熟卵母细胞的孤雌激活、孤雌激活胚胎的体外培养和卵母细胞成熟过程中细胞因子的作用以及IGF-I促进卵母细胞成熟的机理作了研究,以建立卵母细胞体外发育的技术平台,为转基因猪的研制和猪卵母细胞发育和克隆相关机理的研究奠定基础。 本研究分为4个部分,第一部分对影响猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活后胚胎分裂的几个重要条件进行了比较研究,确立了一种较好的培养方法:与颗粒细胞共培养,找到了一种适合猪卵母细胞体外成熟的培养基:mNCSU-23+15IU/mlPMSG+20IU/mlHCG+15%PFF+0.57mM半胱氨酸,成熟率和分裂率分别为(86.7±3.35)%和(86.3±4.16)%,国外报道的最高成熟率为(85.7±4.1)%;第二部分对猪卵母细胞孤雌激活的化学方法进行了研究,确立了化学激活猪卵母细胞的两种最佳方法:1)将成熟的去卵丘颗粒细胞的MII期卵母细胞用20μmol/Lionomycin(离子酶素)作用30min,再将卵母细胞培养于含5μg/mlCB(细胞松弛素)和5mM/L 6-DMAP(6-二甲基氨基嘌呤)的NCSU-23培养液中,卵裂率和桑囊胚发育率达到(76.7±7.6)%和(37.1±6.4)%2)将成熟的去卵丘颗粒细胞的MII期卵母细胞在200μM/L的Thimerosal(乙基汞硫代水杨酸钠)中处理20min,再与8mM的DTT(二硫苏糖醇)共孵育30min,卵裂率和桑/囊胚形成率为(81.0±2.8)%和(39.6±2.7)%;第三部分对孤雌激活胚胎的培养条件进行了研究,确立了一种最佳的胚胎培养条件:在SOF简单培养基中添加颗粒细胞进行前3天的培养,然后转入添加胎牛血清的NCSU—23培养基并和输卵管上皮细胞进行后期的培养,其桑椹胚和囊胚的发育率为(59.5±3.2)%;第四部分研究了IGF-I、
【学位授予单位】:中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S828.3

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 钱云,师蔚群,朱猛进,丁家桐,范必勤,YutakaFUKUI;卵泡内环境对猪卵泡卵体外成熟和发育的影响[J];生命科学研究;2001年02期
2 孟庆刚,张成林,张永忠,李光鹏,谭景和;猪小腔卵泡卵母细胞体外成熟研究[J];畜牧兽医学报;2001年03期
3 叶华虎,陈振文,任文陟,宋德光,崔宗虎,母连志,姜永和,郑伟;犬卵母细胞体外成熟的影响因素[J];中国兽医学报;1998年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张秀美,艾武,王莉莉,宋敏训,牟建青,徐苏云,杨奎,陈溥言;鸡传染性喉气管炎的诊断与病毒分离鉴定[J];山东农业科学;1997年06期
2 ;Effects of Medium on in Vitro Maturation of Pig Oocytes and in Vitro Early Development of Parthenogenetic Embryos[J];Animal Husbandry and Feed Science;2011年04期
3 张艳,李京培,明亮,李文芳;银杏叶提取物的体外抗病毒作用[J];安徽中医临床杂志;2000年03期
4 张任娜;覃志初;帅领;刘晓燕;王豪举;;鸭瘟病毒的分离与鉴定[J];安徽农学通报;2007年20期
5 余道伦;邢华;朱德建;;犬辅助生殖技术研究进展[J];安徽农业科学;2006年08期
6 张煜;苏建青;褚秀玲;成军;高丰;;水泡性口炎的发病机理与防制[J];安徽农业科学;2007年24期
7 刘晓辉;曹阳;郎洪彦;金海国;罗晓彤;刘铮;王晓阳;;培养液对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎早期体外发育的影响[J];安徽农业科学;2011年20期
8 何忠梅;宋宇;李庆杰;;千里光体外抗病毒作用研究[J];安徽农业科学;2011年32期
9 朱向秀,高聪,余寿杰,王静静,曾繁荣,罗艳,朱宏艳;血清不同稀释度检测慢性乙型肝炎血清HBeAg和HBsAg的研究[J];安徽预防医学杂志;2000年01期
10 余荣汉;吴纳新;;温度对流行性出血热病毒点片抗原性保存的影响[J];安徽医学;1991年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 何源;冯燕;;重庆市2003年乙脑疫情血清学监测分析[A];重庆市预防医学会2005年学术交流会论文集[C];2005年
2 禹学礼;栗颖华;邓雯;孟雨;;牛腔前卵泡卵母细胞体外受精研究[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
3 胡秀华;何苗;;定量测定轮状病毒滴度的几种方法的优化及细胞系的选择[A];中医药生物化学与分子生物学通讯[C];2008年
4 陈晓宇;李青旺;夏凡;龙玲;赵红卫;韩增胜;张德福;;不同添加物对猪卵母细胞体外成熟的影响[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
5 闫莉;孙晗笑;王峰;莫雪梅;李秀英;许华;张光;;vMIP-Ⅱ联合用药体外抗HIV-1ⅢB实验研究[A];2006年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2006年
6 李红;成进;夏俊;沙依兰古丽;陆桂丽;汪萍;;5株禽新城疫病毒新疆分离株F基因序列测定与遗传进化分析[A];禽类新发传染病高层论坛论文集[C];2009年
7 王珍芹;徐高原;;猪乙型脑炎活疫苗(SA14-14-2株)基础种毒对小公猪的安全性研究[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(下册)[C];2009年
8 刘永杰;夏怡;金婧楠;郭蕊;刘云海;郭勇;李建红;魏学良;;LH不同作用时间对牛卵母细胞体外核成熟的影响研究[A];中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第五届全体会议第十次学术研讨会论文集[C];2009年
9 田允波;许丹宁;孟彦举;陈学进;;不同基础培养液对猪卵母细胞体外成熟的影响[A];中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第五届全体会议第十次学术研讨会论文集[C];2009年
10 景小冬;李林;张建伟;章振华;范国兵;于昌贵;李雅静;郑小兰;姜北宇;;机器与人工鸡胚接种和收获对比试验[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 时景伟;麻疹疫苗减毒机制及疫苗接种后我国麻疹流行病学特点的研究[D];吉林大学;2011年
2 李继庭;银翘柴桂颗粒治疗流感的临床与实验研究[D];广州中医药大学;2011年
3 李文娟;青藏高原(青海省)蚊虫和蚊传虫媒病毒及其与当地疾病关系的研究[D];山东大学;2011年
4 谢彬;基于“肺合大肠”理论的敷胸巴布贴干预Ⅳ诱导小鼠肺炎免疫机制研究[D];辽宁中医药大学;2011年
5 宋素花;温病辨证论治动态思维及清营解表法干预流感病毒感染小鼠Th细胞因子动态表达的研究[D];山东中医药大学;2011年
6 张德福;猪体细胞核移植及其相关技术研究[D];南京农业大学;2008年
7 李旭芳;小鼠播散性巨细胞病毒感染的免疫应答和致病机制研究 1)小鼠脾巨噬细胞DNA感受器AIM2识别MCMV DNA激活其炎性体通路的整体研究 2)Th17细胞在急性播散性MCMV感染致病机制中的作用[D];华中科技大学;2012年
8 姜永厚;新城疫病毒F基因与鸡IL-2重组DNA疫苗的研究[D];东北农业大学;2000年
9 肖长江;小儿热哮微观辨证及清肺平喘法的疗效机理研究[D];湖南中医学院;2001年
10 胡旭;胚芽滋养胶囊对流感病毒感染小鼠肺病变与免疫状态影响的初步研究[D];北京中医药大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李莹;卵泡刺激素及戊酸雌二醇对小鼠卵母细胞体外成熟的影响[D];郑州大学;2010年
2 樊旭成;乌鲁木齐市2007-2010年度流感病毒病原学监测分析[D];新疆医科大学;2010年
3 刘增霞;HBV感染者生活质量量表中文版的临床应用[D];浙江大学;2011年
4 刘霞;鸭源新城疫油乳剂灭活疫苗制备的研究[D];山东农业大学;2011年
5 高静;糖皮质激素对肉仔鸡骨骼肌蛋白代谢影响的研究[D];山东农业大学;2011年
6 秦焕美;牛血清外源病毒检查方法比较和应用[D];吉林大学;2011年
7 张喆;成人腹泻粪便样品中A组轮状病毒全基因分析[D];华中师范大学;2011年
8 董莉娟;HRSV纯化条件的探索及实验性疫苗免疫原性的初步评价[D];北京协和医学院;2011年
9 李媛;天津市流行性感冒流行特征及与气象因素关系研究[D];天津医科大学;2011年
10 修晶辉;猪鸡肠道益生菌株的分离鉴定及其抗TGEV和IBV的作用[D];东北农业大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前7条
1 钱云,丁家桐,刘红林;卵母细胞成熟的形态学特征及其调控[J];国外畜牧科技;1999年06期
2 谭世俭;卢克焕;;不同发情周期阶段和不同体积卵泡的卵母细胞对体外受精及其发育的影响[J];广西农学院学报;1991年03期
3 张涌,刘素娟,李勇,李裕强;山羊小腔卵泡卵母细胞的体外成熟和体外受精[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);1996年02期
4 李朝军,范必勤,王金(口奚),张祖暄;FSH、EGF、胰岛素促进小鼠卵母细胞体外减数分裂恢复机制的研究[J];细胞生物学杂志;1997年01期
5 张锁链,王建国,何牧仁,刘东军,旭日干;羔山羊卵巢卵母细胞体外成熟培养条件的研究[J];畜牧兽医学报;1996年02期
6 秦鹏春,谭景和,吴光明,王林安,杨庆章,冯怀亮,郝艳红,张秋明,徐立滨;猪卵巢卵母细胞体外成熟与体外受精的研究[J];中国农业科学;1995年03期
7 徐照学,钱菊汾,兰亚莉,张趁心,辛晓玲,贺文杰;BFF、rbGH对牛卵泡卵母细胞体外受精后发育的影响[J];中国兽医学报;1996年06期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 朱秀萍,朱淑文,张菁,华修国,唐峰;细胞松弛素B对猪卵母细胞去核的影响[J];上海交通大学学报(农业科学版);2005年03期
2 姜国诚,秦鹏春;猪卵母细胞的体外培养及死活鉴别[J];畜牧兽医学报;1989年03期
3 黄波;;猪卵母细胞玻璃化冷冻的研究[J];畜禽业;2008年05期
4 秦鹏春;杨庆章;吴静;徐昭积;佘万泉;汪嘉燮;;三江白猪排卵、受精和早期胚胎发育的研究[J];东北农业大学学报;1983年03期
5 张嘉保;;猪体外受精技术的研究进展[J];黑龙江畜牧兽医;1991年10期
6 苏友强,夏国良,陈勇,赫晨,傅国栋;次黄嘌呤对猪卵母细胞体外自发成熟抑制作用的研究[J];畜牧兽医学报;2000年01期
7 彭礼繁;罗光彬;;猪颗粒细胞和胎儿成纤维细胞的分离培养与冷冻保存试验报告[J];当代畜牧;2007年07期
8 邓缘;燕海峰;朱立军;;猪胚胎的体外生产技术[J];江西畜牧兽医杂志;2006年02期
9 杨小淦;江明生;卢晟盛;刘红波;任子利;吕培茹;张明;陆阳清;卢克焕;;猪单个卵母细胞体外转录体系的建立[J];动物学杂志;2008年01期
10 朴永泉;王晓明;金一;韩铭明;;半胱氨酸对猪卵母细胞体外成熟、体外受精及GSH水平的影响[J];黑龙江畜牧兽医;2008年12期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘红波;吕培茹;胡林林;杨小淦;左二伟;宁淑芳;韩晓慧;陆阳清;卢晟盛;卢克焕;;基于近红外拉曼光谱的猪卵母细胞激活人工智能监控体系的初步建立[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
2 贾宝瑜;吴国权;朱士恩;;t-10,c-12共轭亚油酸对猪卵母细胞核成熟及早期胚胎发育的影响[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
3 朱志伟;潘建治;陈晓宇;于福先;;NCSU-37培养猪卵母细胞成熟与体外受精研究试验初报[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
4 张立苹;刘西梅;乔宪凤;郑新民;许生成;;低氧环境对猪孤雌胚胎体外发育的影响[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十六次学术研讨会论文集[C];2010年
5 吴国权;贾宝瑜;李俊杰;岳明星;杜明;王亮;朱士恩;;L-肉碱对猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活早期胚胎发育能力的影响[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
6 黄雅琼;张晓溪;李童;陈玉;覃琦丽;杨娟;张顺;刘继龙;石德顺;谭世俭;;猪核移植卵母细胞体外成熟过程中减数分裂进程的研究[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
7 朱秀萍;蒋伟娟;艾晓杰;徐动;朱淑文;;猪卵母细胞体外成熟培养时间及去核方法的研究[A];2008年上海市动物学会学术会议论文集(一)[C];2008年
8 薛振华;潘登科;肖炜;罗学明;朱振营;王晓凤;杨宇泽;谷传慧;云鹏;;利用体细胞核移植技术生产优秀公猪[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
9 薛振华;肖炜;罗学明;潘登科;;利用体细胞核移植技术生产优秀公猪[A];中国畜牧兽医学会养猪学分会第五次全国会员代表大会暨养猪业创新发展论坛论文集[C];2010年
10 刘凤军;王秀爱;庄益芬;叶屹峰;余翠月;洪志勇;陈梅芳;陈曦;谢旭东;张文昌;;微电极融合法对猪体细胞克隆胚胎融合激活及胚胎发育的影响[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 贾宝瑜;共轭亚油酸对猪卵母细胞体外成熟、胚胎培养和冷冻保存的作用机制[D];中国农业大学;2014年
2 黄雅琼;猪体细胞核移植相关技术研究[D];广西大学;2008年
3 潘登科;影响猪体细胞克隆胚胎发育能力的因素研究[D];中国农业大学;2005年
4 陈晓宇;体外共培养体系在猪卵母细胞核质同步成熟、受精以及胚胎发育中的研究[D];西北农林科技大学;2006年
5 徐小明;胎猪骨髓间充质干细胞核移植及核移植胚胎干细胞的分离[D];西北农林科技大学;2006年
6 易康乐;Figla和BDNF对猪和牛卵母细胞及早期胚胎生长发育的影响[D];吉林大学;2008年
7 陶勇;一氧化氮与猪卵母细胞减数分裂成熟[D];中国农业大学;2004年
8 高姗姗;人卵母细胞玻璃化冷冻方案的改良—相关基础研究及初期临床应用[D];山东大学;2009年
9 陈颖;MSTN基因敲除猪胚胎成纤维细胞的构建及其基因敲除猪的初步研究[D];吉林大学;2007年
10 张运海;利用体细胞核移植技术生产猪克隆胚胎的研究[D];中国农业大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吴霞;猪卵母细胞脂质相关基因表达谱研究[D];四川农业大学;2011年
2 刘明兰;ASF1A在猪卵母细胞体外成熟过程中的作用[D];西北农林科技大学;2013年
3 马成勋;猪GV期卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究[D];安徽农业大学;2009年
4 胡衍彪;猪繁殖相关基因表达与卵泡数性状相关性研究[D];南京农业大学;2005年
5 刘贞伟;猪成熟卵母细胞激活及其孤雌胚发育研究[D];西南农业大学;2005年
6 亨利;猪卵母细胞体外成熟的研究[D];广西大学;2002年
7 范叶;猪卵母细胞体外培养及促性腺激素受体mRNA表达的研究[D];湖南农业大学;2005年
8 李俊;猪卵母细胞体外培养和体外受精与猪胚胎非手术法移植研究[D];西北农林科技大学;2005年
9 许伍霞;猪卵泡卵母细胞玻璃化冷冻与体外培养的研究[D];湖南农业大学;2006年
10 黄晶;猪卵母细胞玻璃化冷冻及体外成熟的研究[D];西北农林科技大学;2007年
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