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《中国人民解放军军事医学科学院》 2005年
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受体介导的甘露糖化蛋白抗原的摄取、递呈及淋巴细胞激活

钟国成  
【摘要】:以T淋巴细胞为主的细胞免疫应答在机体的抗肿瘤机制中起着至关重要的作用。在产生细胞免疫应答的过程中,抗原的特性和树突状细胞(DC)的功能状态是抗原呈递的关键。随着DC的成熟,DC诱导T淋巴细胞应答的能力亦增强。目前,基于DC的肿瘤疫苗研究是肿瘤免疫治疗研究领域的热点。 原癌基因HER-2/neu的产物在人类多种上皮来源的肿瘤细胞中异常过表达,它参与了肿瘤的发生、发展及恶性化转移,而在正常组织和细胞中,HER-2/neu则低表达或不表达。因此,HER-2/neu是免疫治疗的良好靶分子。HER-2/neu配体结合区第2结构域(RLD2)是HER-2/neu蛋白的胞外区结构域。在本研究中,根据DC表面甘露糖受体可介导高效的抗原内化,我们表达、纯化了HER-2/neu RLD2蛋白,并对其进行了甘露糖修饰,以增强DC对抗原的摄取、呈递,促进DC成熟,进一步增强针对抗原的细胞免疫应答,从而为新型甘露糖化肿瘤疫苗的研制提供理论依据。 本课题研究的主要内容包括: 第一部分 RLD2蛋白表达及纯化 采用本室已构建的重组质粒p7IG-TrxA/RLD2转化感受态BL21(DE3),获得阳性转化克隆,并获得TrxA与RLD2蛋白在大肠杆菌中的可溶性共表达。表达产物经免疫印记分析可被抗HER-2/neu特异性抗体识别。经离子交换层析和镍亲和层析纯化,RLD2蛋白的纯度达85%。用质谱法分析RLD2蛋白的分子量,与预期大小相符。HER-2/neu RLD2蛋白的高效可溶性表达为蛋白抗原的甘露糖化修饰打下了基础。 第二部分 RLD2蛋白的糖基化修饰和荧光素标记 采用化学方法对纯化的RLD2蛋白(L2)进行了甘露糖化修饰,通过质谱法对糖基化产物进行分析。结果显示,RLD2拟糖蛋白(mL2)在质谱图上呈现甘露糖修饰蛋白的分子量预期峰形。随后对修饰与未修饰的蛋白用FITC标记,以利于下一步甘露糖化受体介导的DC抗原摄取和提呈的实验研究。 第三部分 人外周血来源DC的诱导 从健康志愿者的外周血中分离单个核细胞,经rhGM-CSF、rhIL-4及脂多糖
【学位授予单位】:中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R392

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