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抗呼吸道合胞病毒中药及有效部位的筛选

方学平  
【摘要】:呼吸道合胞病毒(RSV)是导致婴幼儿急性下呼吸道感染的最重要的病原体,同时也是致使某些免疫抑制人群和年老人群发病和死亡的重要的原因。目前,唯一允许用于化学疗法的药物是病毒唑,它被严格用于高危和病情严重的患儿。人类单克隆抗体palivizumab(Synagis)和静脉用免疫球蛋白(RSV-IGIV)已经注册使用,疗效较好,但是其治疗一个周期所需的费用很高,不能普遍应用于临床。迄今,还没有疫苗用于预防RSV感染。因此,迫切需要具有高效、廉价的防治RSV感染的药物。本研究的目的是筛选具有RSV抑制作用的中药,并从中选择抑制效果显著的中药分离有效部位,研究结果将为进一步分离提取有效成分,开发能高效、特异的防治RSV感染的药物奠定实验基础,并为临床处方的配伍提供线索。 在细胞病变抑制实验的基础上,对观察指标和结果评价的方法进行改进,建立一种快速、可靠的筛选抗呼吸道合胞病毒药物的方法。通过比较不同实验组接种病毒后出现的病变数目,探讨了最佳的细胞接种密度和结果判定时间。并比较改进实验和空斑减数实验测定病毒唑的EC_(50)的差异。结果表明改进实验和空斑减数实验测得的病毒唑的EC_(50)平均值没有显著性差(P0.05),说明改进实验准确、可靠。最佳的实验条件是:每孔接种Hep-2细胞(1.5~2.0)×10~4个为宜,24h~36h后接种病毒,4d~5d判读最后结果。 从中医典籍中筛选38味中药,采用新建立的改进的细胞病变抑制实验检测抗病毒活性,测定半数有效浓度(EC_(50)),并用MTT法检测药物对Hep-2细胞的毒性,测定半数中毒浓度(CC_(50)),计算选择指数(SI=CC_(50)/EC_(50))。初步筛选结果表明,23种中药对RSV有不同程度的抑制作用,半数有效浓度(EC_(50))范围从(12.2~719.1)μg/ml,选择指数范围从4~969,其中菊花水提取液的EC_(50)为12.24μg/ml,选择指数(SI)高达969,体外作用环节的研究结果也表明,菊花提取物对RSV的复制过程有明显的抑制作用,因此选择菊花进一步分离确立其有效部位。 用95%乙醇超声提取菊花粗粉,利用系统萃取法进一步分离,获得的不同部


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