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《中国人民解放军医学院》 2019年
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人谷胱甘肽S转移酶P1对辐射诱导肺细胞损伤的影响

贺琦多  
【摘要】:研究目的通过细胞实验及动物实验研究人谷胱甘肽S转移酶P1(GSTP1)蛋白对辐射引起肺细胞损伤的影响;模拟GSTP1活性下降状态,为临床发现的GSTP1单核苷酸多态性与放射性肺炎发生率相关的现象寻找基础实验证据支持。研究方法1、通过RNA干扰技术和质粒转染技术调控肺上皮细胞GSTP1蛋白表达。2、利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)以及蛋白质免疫印迹实验(Western Blot)对蛋白表达进行检测。3、通过细胞MTT实验检测细胞增殖活性。4、利用克隆形成实验测定细胞辐射敏感性。5、使用活性氧探针DCFH-DA、细胞凋亡检测探针AnnexinV,利用流式细胞术对细胞内活性氧、凋亡进行检测。6、利用比色法检测细胞内丙二醛(MDA)含量,反映细胞脂质氧化损伤。研究结果1、~(60)Coγ射线照射小鼠肺组织使小鼠肺组织GSTP1蛋白表达下降。2、肺上皮细胞BEAS-2B转染GSTP1 siRNA会使GST蛋白表达减少,活性下降。3、干涉GSTP1蛋白后,加强了~(60)Coγ射线照射对细胞增殖的抑制作用(照射后第五天,对照组与两实验组OD值为1.035±0.041 VS 0.626±0.054/0.366±0.032,P0.05)。4、干涉GSTP1蛋白后,细胞放射敏感性增高,实验组剂量存活分数拟合曲线 N=1.597/1.497,k=0.3663/0.3754,对照组 N=2.564,k=0.3392,实验组 DO 值低于对照组。5、GSTP1蛋白影响细胞的氧化应激状态,干涉GSTP1蛋白使细胞氧化损伤加重。6、干涉GSTP1蛋白促进辐射诱导的细胞凋亡(照射后对照组凋亡细胞比例与实验组凋亡细胞比例 12.33±1.16%VS 17.38±1.65%/22.88±1.20%)。7、干涉GSTP1蛋白能促进辐射诱导人支气管上皮细胞Beas-2B间质标志物增高,过表达GSTP1蛋白则对其表达增高有所缓解。结论本实验通过调控GSTP1蛋白表达,模拟了GSTP1活性下降、表达降低时辐射对肺上皮细胞的影响。GSTP1蛋白表达下降,活性减低会加重辐射引起的细胞氧化损伤,促进辐射诱导的细胞凋亡,使细胞放射敏感性增高,促进EMT过程。GSTP1通过缓解辐射造成的细胞氧化应激状态减轻放射性肺损伤。
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