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RAPD及SRAP标记在中国枣属植物系统分类学中的应用研究

李莉  
【摘要】: 枣属(Ziziphus Mill.)是鼠李科(Rhamnaceae)中最具经济价值的一个属。枣属的近代分类学研究可追溯到18世纪初,但一直以来在枣属分类问题上比较混乱,曾有40种,60种,100种等多种说法,枣属属下分类系统是否自然尚未可知。基于此,本研究采用RAPD和SRAP技术相结合,对原产我国的枣属全部14个种和枣的变种进行分析,旨在为枣属植物的分子系统发育提供新的证据,并对枣属属下及种下的系统关系进行探讨。主要研究结果如下: 1.以枣的成熟鲜叶为试材,分别采用-20℃、-70℃和硅胶脱水干燥3种方法保存样品,采用简易CTAB法、高盐沉淀法与高盐低pH值法分别对3种方法保存的样品及对照样(鲜叶)进行了基因组DNA提取效果的比较分析。结果表明,3种方法均能有效地从枣叶片中获得质量较高的DNA,以高盐沉淀法所得的DNA纯度最高,高盐低pH值法次之。就DNA的产量而言,高盐沉淀法的DNA产量相对较低。硅胶干燥法样品与鲜叶相比,所提DNA的质量和产量均无明显差异,均能满足PCR扩增要求。硅胶干燥保存法适于野外远距离采样。 2.采用正交试验设计的方法,建立了枣SRAP分析的优化反应体系,即20μL反应体系中含有1×buffer,dNTP 200μmol/L、引物各30ng、MgCl_2 2.5mmol/L、Taq酶1.0U和模板DNA 20ng。适宜的扩增程序为94℃预变性5min;94℃变性1min,33℃复性1min,72℃延伸1min,5个循环;94℃变性1min,53℃复性1min,72℃延伸1min,30个循环;最后72℃延伸5min。本研究建立的枣SRAP体系重复性好,稳定性强。 3.在26个供试材料中,31个RAPD引物共扩增出921条带,多态性条带为919条,多态性比率为99.78%。RAPD聚类结果表明:以0.77的相似系数为阈值,所有供试材料被分为七类,即第一类包括毛脉枣;第二类包括滇枣、毛果枣、无瓣枣、毛叶枣、褐果枣、皱枣;第三类包括斯氏铜钱树;第四类包括枣、酸枣及枣的变种;第五类包括大果枣、蜀枣和山枣;第六类包括小果枣;第七类包括球枣。 4.在26个供试材料中,19个SRAP引物组合共扩增出580条带,多态性条带为570条,多态性比率为98.28%。SRAP聚类分析表明:以0.75的相似系数为阈值,所有供试材料被分为五类,即第一类包括毛脉枣、滇枣、毛果枣、无瓣枣、毛叶枣、褐果枣、皱枣;第二类包括斯氏铜钱树;第三类包括枣、酸枣及枣的变种;第四类包括大果枣、蜀枣和山枣;第五类包括小果枣和球枣。 5.通过RAPD和SRAP数据的综合分析,结果表明:枣和酸枣应该归为一个种;蜀枣和山枣应该归为一个种;大果枣、蜀枣和山枣亲缘关系很近,三者可能起源于共同的祖先种;毛果枣与无瓣枣,褐果枣与皱枣遗传相似系数较高,亲缘关系较近。枣的种下各变种与原变种只是果实、枝条等的变异,够不上变种级变异,枣的种下不宜设变种。


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