应用组织工程学方法修复脊髓损伤基本问题的研究
【摘要】:脊髓损伤的治疗是临床上的难题,也是神经科学领域研究的热点。本文根据组织工程学的基本原理,选取具有应用前景的种子细胞和支架材料,从体外到体内对修复脊髓损伤的基本问题进行了研究,主要研究内容与结果如下:
(1)从成年大鼠的嗅球提取嗅鞘细胞,经过一系列纯化步骤得到可供移植的高纯度嗅鞘细胞,进行免疫荧光鉴定。从孕12天的胎鼠大脑皮层提取神经干细胞,免疫荧光鉴定表明无论是单细胞还是神经球都高度表达其标志性蛋白巢蛋白(nestin)。在含有10%胎牛血清的培养基中单独培养神经干细胞5天发现绝大多数的神经干细胞都分化成了星形胶质细胞,而共培养嗅鞘细胞和神经干细胞的结果表明嗅鞘细胞的存在能够促进神经干细胞向神经元分化。
(2)建立脊髓损伤模型,在成年大鼠胸髓第九节处(T9)进行3/4横切。手术后一周,四组脊髓损伤的大鼠分别注射DMEM/F12培养基、嗅鞘细胞、神经干细胞和两种细胞共混物。功能学恢复评价结果表明共移植组的BBB评分明显高于其他三组,免疫组织化学染色和组织学观察的结果都表明有新生神经纤维通过损伤区。共移植嗅鞘细胞和神经干细胞能够同时促进神经再生和改善运动功能恢复。共移植的效果要好于单独移植嗅鞘细胞或者神经干细胞。
(3)分别制备了壳聚糖膜、多孔支架材料和多微通道导管,研究了神经干细胞在三种材料上分化和增殖的结果。在含有10%胎牛血清的培养基中,神经干细胞在壳聚糖膜上绝大部分都分化成了星形胶质细胞,而在壳聚糖多微通道导管中分化成神经元的比例有明显增加。在含有碱性成纤维生长因子(bFGF)的无血清培养基中,神经干细胞在壳聚糖膜上表现出了最好的增殖结果,在多微通道导管上有适度的增殖,而在多孔支架材料上增殖最少。以上结果表明,壳聚糖的拓扑学结构对于调控神经干细胞分化和增殖起着重要作用。
(4)制备了壳聚糖—海藻酸钠水凝胶作为嗅鞘细胞和神经干细胞的载体。体外表征结果表明壳聚糖—海藻酸钠水凝胶是通过壳聚糖上带正电的氨基基团和海藻酸钠上带负电的羧基基团之间相互作用构建而成。两种细胞在壳聚糖—海藻酸钠水凝胶上都表现出较好的增殖结果,表明了此水凝胶在神经组织工程中具有良好的应用前景。
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1 |
马胜忠;神经干细胞在脊髓损伤中的应用前景[J];国外医学.骨科学分册;2002年02期 |
2 |
程映华,梁晶,王晓冬,张沛云,郑祖根,顾晓松;壳聚糖神经干细胞复合物修复大鼠完全性脊髓损伤的组织学观察[J];中华实验外科杂志;2004年01期 |
3 |
蔡培强,汤逊,林月秋,徐林,阳运康,周田华;人胚神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤[J];中华实验外科杂志;2005年08期 |
4 |
李剑锋;闫金玉;;神经干细胞移植治疗脊髓损伤的研究现状[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年14期 |
5 |
李国刚;孙涛;赵其娜;王泰华;;神经干细胞治疗脊髓损伤的研究进展[J];山东医药;2010年31期 |
6 |
蔡培强,汤逊,林月秋,Martin Oudega,Bas Blits,徐林,阳运康;Lentivirus介导分泌神经营养因子-3的基因工程神经干细胞移植治疗脊髓损伤的实验研究[J];中华外科杂志;2005年16期 |
7 |
张赞;代广辉;王晓东;程洪斌;史晶;刘学彬;李敏;李鲁生;安沂华;;神经干细胞移植治疗脊髓损伤临床疗效观察[J];医药论坛杂志;2010年21期 |
8 |
张辉;神经干细胞在治疗实验性脊髓损伤中的应用进展[J];国外医学.生物医学工程分册;2005年03期 |
9 |
代广辉,王峰;脊髓损伤的移植治疗进展[J];中华神经医学杂志;2003年02期 |
10 |
张文贤;王昱军;王小燕;吕江宏;;神经干细胞信号转导通路的研究进展[J];中国修复重建外科杂志;2008年04期 |
11 |
张磊;史晶;王运平;肖晓芬;;神经干细胞移植治疗脊髓损伤后遗症患者的护理[J];护理学杂志;2007年21期 |
12 |
丁继固;;脊髓源神经干细胞转基因治疗脊髓损伤的研究及展望[J];咸宁学院学报(医学版);2006年05期 |
13 |
胡萌;吕刚;;神经干细胞移植治疗脊髓损伤的研究与现状[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年19期 |
14 |
崔志远;王志杰;;神经干细胞移植治疗脊髓损伤的研究现状[J];齐鲁医学杂志;2011年02期 |
15 |
尹国栋;汤逊;林月秋;周田华;乌江;刘彬;;人胚神经干细胞的长期体外培养[J];伤残医学杂志;2005年04期 |
16 |
王干;敖强;龚锴;公衍道;张秀芳;;联合移植嗅鞘细胞和神经干细胞治疗大鼠胸段脊髓损伤[J];生物物理学报;2009年S1期 |
17 |
陈嘉利;周继辉;郎金波;;神经干细胞在脊髓损伤中的应用与进展[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年14期 |
18 |
蒋震伟,陆华,惠国桢;神经干细胞移植治疗脊髓损伤的实验性研究进展[J];江苏医药;2003年05期 |
19 |
叶茂;宁志丰;刘艳西;刘俊;陈拥彬;;神经干细胞不同移植途径治疗脊髓损伤的比较研究[J];四川医学;2011年01期 |
20 |
许祖远;方煌;罗永湘;;神经干细胞静脉移植治疗脊髓损伤的实验研究[J];中国矫形外科杂志;2007年06期 |
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