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毕赤酵母表达硒代重组人血清白蛋白和几种豆科植物有机硒含量的比较

陈思  
【摘要】: 硒(Selenium)是生物体必需的微量元素,具有抑制癌症、延缓衰老等作用,含硒药物的开发已成为一个研究热点。人血清白蛋白(HSA)也具有很高的药用价值,但是安全性限制了血源HSA的广泛应用。本文根据加入亚硒酸钠后酵母便可以产生硒代氨基酸的思路,把转基因毕赤酵母在含硒基质中培养,以期得到营养价值高、毒性小、利于吸收利用的硒代重组蛋白质。 将能够成功表达重组人血清白蛋白(rHSA)的巴斯德毕赤酵母培养至诱导期后,流加亚硒酸钠,对照发酵液不加入亚硒酸钠,通过对比相同菌株在两组培养基中表达的rHSA的含硒量,判断硒能否以硒代氨基酸(SeMet,SeCys)的形式存在于重组蛋白质中。发酵液经热处理、超滤、离子交换和丙酮沉淀等步骤后,进行Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳、X射线能量色散谱(EDX)和原子吸收分析。结果表明,加硒发酵液样品中硒元素的质量分数比对照多23.2%,硒与蛋白质的质量比为0.0069,高于对照发酵液近35倍,初步证明无机硒可以被毕赤酵母同化,转化为硒代氨基酸,并形成硒代重组蛋白质。 豆科植物的蛋白质含量高,营养丰富,有很好的保健功效,是对无机硒进行生物有机化的理想载体,具有较强的生物富集能力。本文通过对不同品种豆科植物的硒含量进行了比较发现,来自低硒地区的9号芸豆、10号奶花豆的蛋白富硒能力比较好,10号尤其明显;来自高硒地区的1号大豆中硒含量也较高,而且大豆蛋白的营养价值高于其它豆科植物蛋白;最终确定豆科植物蛋白的提取方法为:浸泡、研磨、过滤制浆、离心、丙酮沉淀、蛋白烘干。


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