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天津地区PRRSV类NADC30毒株的监测、分离毒株的基因组特征与致病性分析

孙英峰  
【摘要】:猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种严重影响生猪产业的重要病毒性疫病。近年来,我国陆续报道PRRSV类NADC30毒株的流行,给猪场PRRS防控带来新的挑战。本研究对天津地区猪场PRRSV类NADC30毒株的感染情况进行了监测,分析了分离毒株的基因组特征以及致病性,并评价了现有疫苗对分离毒株攻毒的免疫保护效力,以期了解天津地区PRRSV类NADC30毒株的流行状况,为PRRSV类NADC30的防控提供依据。基于PRRSV类NADC30毒株Nsp2基因缺失的特性,建立了区分PRRSV经典毒株、高致病性毒株(HP-PRRSV)和类NADC30毒株的RT-PCR鉴别检测方法。对2014-2016年天津地区63个猪场396份临床样本进行了检测,结果表明,PRRSV阳性检出率为26.26%(104/396),其中HP-PRRSV阳性率为69.23%(72/104),PRRSV经典毒株阳性率为4.81%(5/104),类NADC30阳性率为25.96%(27/104)。2014-2016年类NADC30毒株年度阳性率依次为6.25%、17.07%和58.06%,提示类NADC30毒株感染呈现增高趋势。对扩增的Nsp2基因的变异分析表明,NADC30阳性样品中的13份样本除具有131个特征性氨基酸缺失外,还存在2个氨基酸缺失。3份阳性样品的ORF5存在1个氨基酸缺失,类NADC30毒株的Nsp2、ORF5变异呈现多样化。结合猪场使用PRRSV疫苗免疫的调查,结果显示,免疫经典PRRSV疫苗(MLV-VR2332株、CH-1R株、R98株)和HP-PRRSV减毒活疫苗(TJm-F92株、JXA1-R株)的猪场均发生类NADC30毒株感染。采用MARC-145细胞系从PRRSV类NADC30阳性样本中分离病毒,经IFA和RT-PCR鉴定,共分离到 7 株 PRRSV,分别命名为 TJnh1401、TJnh1501、TJnh1502、TJdg1601、TJdg1602、TJbd1601和TJbd1602。结合Nsp2和ORF5序列分析结果,选取分离毒株TJnh1501进行蚀斑纯化和全基因组序列测定。结果显示,分离毒株TJnh1501在MARC-145细胞上的病毒滴度可达107.0TCID50;其全基因组序列与NADC30毒株同源性仅为86.6%,而与HP-PRRSV毒株的同源性达96.3%,且Nsp2具有NADC30毒株131个氨基酸缺失的分子特征;应用SimPlot生物学软件的分析结果表明,TJnh1501为HP-PRRSV疫苗毒株与NADC30毒株的重组病毒,重组位置位于非结构蛋白编码区(Nsp2)的1737nt-3506nt。分析了 TJnh1501对健康仔猪的致病性。结果显示,TJnh1501感染仔猪呈现体温升高、精神沉郁、呼吸困难、流鼻涕和日增重下降的临床症状;感染仔猪的肺脏水肿、实变,肺支气管周边炎性细胞浸润、支气管黏膜上皮脱落、血管内瘀血,感染组仔猪肺脏评分显著高于对照组(p0.05)。由此表明,重组病毒TJnh1501对仔猪具有一定的致病力。进一步评价了现有商品化PRRSV疫苗对分离毒株TJnh1501的免疫保护效果。结果显示,MLV Inglevac PRRS(?)和HP-PRRSV减毒活疫苗JXA1-R株免疫仔猪不能抵抗TJnh1501的攻击,表明这两种疫苗对分离毒株TJnh1501的感染不能提供有效的免疫保护。


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1 孙英峰;天津地区PRRSV类NADC30毒株的监测、分离毒株的基因组特征与致病性分析[D];中国农业大学;2017年
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