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重庆地区畜禽大肠埃希菌耐药性与ESBLs基因分析

王豪举  
【摘要】:大肠埃希菌耐药性的产生与其特性、耐药质粒传播和抗生素的使用等因素密切相关,多重耐药菌株的出现使大肠埃希菌的耐药问题日渐严重。超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)是革兰阴性菌对头孢菌素类药物最重要的耐药机制,产ESBLs大肠埃希菌给人和动物健康构成严重威胁,已成为最为关注的公共卫生问题之一。本研究通过对临床分离的畜禽大肠埃希菌耐药性与ESBLs基因分析,为评价重庆地区畜禽细菌耐药现状、ESBLs耐药基因流行规律提供依据。本试验以2014-2016年从重庆7个区县13个养殖场分离的1455株鸡、猪和牛源大肠埃希菌为对象,测定其对抗生素的敏感性,并检测了所有分离菌的多重耐药基因、ESBLs耐药基因类型,对部分分离菌进行了多位点可变数串联重复分析法(MLVA)分型。主要结果如下:(1)1455株分离菌对28种抗生素均有不同程度的耐药性,耐药率在1.1%-89.1%之间。试验菌对碳青霉烯类的亚胺培南和氨基糖苷类的阿米卡星最为敏感,耐药率仅有1.1%和5.4%,对阿莫西林耐药最为严重,耐药率平均达到89.10%。氨基糖昔类、四环素类、酰胺醇类和喹诺酮类药物中耐药率最高的分别是安普霉素(45.5%)、四环素(68.8%)、氟苯尼考(55.9%)和萘啶酸(46.1%)。牛源菌株对氨基糖苷类药物和喹诺酮类药物耐药均在5%以下,并且对诺氟沙星100%敏感。(2)所有分离菌多重耐药现象明显,对0-5、6-10、11-15、16-20、21-25和26-28种药物耐药菌株分别占总分离菌株的15.7%、17.6%、27.7%、22.7%、15.1%和1.2%。其中1株分离自养猪场菌株对28种药物耐药,1株分离自牛场的菌株对所有药物敏感。鸡源菌株普遍比猪源、牛源菌株耐药性严重;冬、春季节的分离株耐药率普遍高于夏秋季分离菌;不同区县鸡源分离菌耐药率差异不明显,但各饲养场猪源分离菌的耐药率存在一定差异。(3)1455株大肠埃希菌中,有1398株携带1种以上ESBLs基因,占所有菌株数的96.1%。这些菌株共有12种ESBLs基因类型。blaTEM和blaCTX-M型耐药基因在重庆地区养殖场中普遍存在,blaTEM基因型最多(59.3%),其次为blaTEM+CTx-M(21.9%)。(4)采用MLVA分型方法对2014-2015年分离的399株E.coli鸡源与猪源分离株进行了基因分型,筛选出具有高分辨率适用于重庆地区大肠埃希菌基因的6个MLVA位点组合(GECM-6),并构建了E.col分离株MLVA分型结果进化树,该进化树将大肠埃希菌按各位点等位基因数目的不同共分为263个GECM-10菌株型,所有菌株MLVA分型结果比较分散,得到不同类型的GECM-10菌株型,未发现占绝对优势的GECM-10菌株型,菌株在基因水平上具有多态性,且不同区域菌株的GECM-10菌株型差异比较明显。总之,本研究对1455株分离菌在来源、季节、用药情况等方面进行了系统分析,揭示了重庆地区畜禽源大肠埃希菌的耐药现状、规律和多重耐药现象,为指导临床用药提供了依据;检测出重庆地区产ESBLs畜禽源大肠埃希菌有12种基因类型,其中blaTEM和blaCTX-M为重庆地区ESBLs优势基因型,为合理用药提供了理论保证;筛选出具有高分辨率的6个MLVA位点新组合(GECM-6),适用于重庆甚至西南地区畜禽大肠埃希菌的日常基因分型检测和暴发时的流行病学调查,可从源头上控制和减少多重耐药菌株的产生。


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