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鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因在转基因烟草中的表达

张丹  
【摘要】: 研究了传染性法氏囊病病毒抗原蛋白基因IBDV VP2在烟草中的表达情况,证明转基因烟草中产生了能与IBDV特异抗血清反应的IBDV抗原蛋白,为研究转基因植物中生产的外源蛋白VP2的免疫学功能奠定了基础,并为利用转基因植物生产可食疫苗提供了实验依据。 构建了表达载体pBIN19-ROK219,以IBDV甘肃天水株的抗原基因VP2为目的基因,将VP2基因置于植物组成型表达启动子CaMV 35S之下,构建了一个IBDV VP2基因的植物表达载体pBR-VP2,这样使VP2基因位于农杆菌T-DNA的左右边界重复序列之间。经农杆菌介导法,该表达载体能够将其两边界重复序列之间的序列整合到植物基因组。用冻融法将该表达载体转化农杆菌LBA4404,通过叶盘转化法IBDV VP2基因整合到烟草基因组中,然后进行组织培养,诱导生根,生成转基因植株。在转基因组织生长成植株的过程中,VP2基因随着植物细胞的生长而得到表达。 取生长期烟草植株,经PCR检测和Southern杂交检测,证明外源基因IBDV VP2成功整合到烟草染色体上;Northern杂交分析表明转基因烟草中存在正确转录的IBDV VP2基因的mRNA;Dot-ELISA和Western blot分析证实转基因烟草中产生了能与IBDV特异性抗血清反应的IBDV抗原蛋白,其大小约为50KD。上述结果说明烟草中产生的IBDV VP2重组蛋白具有免疫学功能,能与IBDV特异性抗体反应。


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