收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

猪繁殖与呼吸综合征病毒全基因组分子遗传特征分析

高志强  
【摘要】: 本研究用猪肺泡巨噬细胞(PAMs)从河北地区猪繁殖与呼吸综合征病毒感染猪场和发病猪场猪血清样本中分离到2株猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome vires,PRRSV),分别命名为HB-1(sh)/2002、HB-2(sh)/2002。采用RT-PCR、IFA和免疫电镜方法对这2个分离毒株进行了鉴定,并在PAMs上增殖和测定了TCID_(50)。采用5’Full RACE技术及RT-PCR技术,分段设计引物分别扩增并克隆了2个分离毒株的所有cDNA片段,测序后经序列拼接获得HB-1(sh)/2002、HB-2(sh)/2002的全基因组序列。序列分析表明这2个分离毒株均为美洲型PRRSV,进一步利用GenBank中其它国内外分离毒株的已知序列,用各种分子生物学软件对分离毒株的基因组分子遗传特征进行了生物信息学分析。 1.将RT-PCR检测为PRRSV阳性的猪血清,接种从50日龄SPF仔猪制备的肺泡巨噬细胞(PAMs),分离到2株PRRSV,分别命名为HB-1(sh)/2002、HB-2(sh)/2002。接种物在接种PAMs 48h后开始出现明显的细胞病变,并通过RT-PCR确定了病毒在PAMs细胞上的增殖。利用间接免疫荧光抗体技术在接毒细胞的细胞浆中观察到了特异性的免疫荧光。2株病毒的第二代毒的TCID_(50)分别为10~(-7.5)/0.1ml和10~(-6.5)/0.1ml。通过差速离心法将病毒浓缩后,用1∶10稀释的PRRSV阳性血清与等体积超离样品作用后进行负染,电镜观察到了大小约60nm的病毒粒子。 2.利用分离毒株的第二代细胞毒,采用5’Full RACE技术及RT-PCR方法,分段设计引物,成功扩增出PRRSV HB-1(sh)/2002和HB-2(sh)/2002的全部基因组cDNA片段,分别将其克隆到pGEM-Teasy质粒载体,对鉴定为阳性的重组质粒进行测序,经序列拼接获得2个分离毒株的全基因组序列。结果表明,HB-1(sh)/2002和HB-2(sh)/2002的全基因组长度分别为15411nt和15373nt(不包括PolyA尾)。序列比较显示二者的基因组结构相同,但发现HB-2(sh)/2002的Nsp2存在编码12个氨基酸的36个核苷酸缺失,结构蛋白GP3存在编码1个氨基酸的3个核苷酸缺失。二者的全基因组序列相似性为93.0%。 3.序列比较结果显示HB-1(sh)/2002与国内外各美洲型分离株全序列相似性在89.1%~96.0%之间,但与欧洲型分离株LV株的差异较大,相似性为54.7%;HB-2(sh)/2002与国内外各美洲型分离株全序列相似性在88.7%~95.1%之间,与LV株的全序列相似性为54.3%,表明HB-1(sh)/2002和HB-2(sh)/2002均为美洲型分离株。依据Nsp2与ORF5序列对国内外分离株进行了系统进化分析,表明依据Nsp2序列美洲型分离株可初步划分为两个亚群;依据ORF5序列可划分为5个亚群,我国大陆分离株分属于其中的2个亚群,即HB-1(sh)/2002、HB-2(sh)/2002及CH-1a的遗传距离较近,属于1个亚群;BJ-4、S1和J1属于另1个亚群。对PRRSV的二级结构和表位分析结果显示,不同分离株间存在差异。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 闫丽萍;周艳君;侯艳红;华荣虹;安同庆;童光志;;猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白基因ORF3、ORF5和ORF6在真核细胞中表达[J];中国预防兽医学报;2007年07期
2 刘涛;陈赛娟;孙继国;苏霞;王娇;赵泽坤;张平;付琦;;河北猪繁殖与呼吸综合征病毒地方株HB-4(hs)株ORF5-7基因变异分析[J];华北农学报;2008年04期
3 马平;蔡雪辉;刘永刚;石文达;王淑杰;王洪峰;李成君;张琪;;猪繁殖与呼吸综合征病毒GD3株的分离鉴定及其分子特征[J];中国预防兽医学报;2009年01期
4 廖立珊;詹爱军;杨俊兴;曾少灵;花群义;余兴龙;秦智锋;林庆燕;;猪繁殖与呼吸综合征病毒A06株单克隆抗体的制备及鉴定[J];动物医学进展;2009年12期
5 于新友;沈志强;管宇;南松剑;王金良;肖跃强;唐娜;;PRRSV HN25株ORF5基因的克隆和重组腺病毒的构建[J];畜牧与兽医;2010年01期
6 闫峰;兰海楠;王珊珊;孔金超;郑鑫;;猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体胶体金探针的制备与纯化[J];黑龙江畜牧兽医;2010年11期
7 许立华,苏小运,王玲,苏鑫铭,任雪枫,苏春霞,陈溥言;猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因和流感病毒HA基因的联合表达及应用[J];中国病毒学;2003年06期
8 江云波,方六荣,肖少波,张辉,陈焕春;表达猪繁殖与呼吸综合征病毒修饰型GP5m蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其在小鼠的免疫反应[J];生物工程学报;2005年06期
9 江云波;方六荣;肖少波;张辉;陈焕春;;猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5和M蛋白共表达的自杀性DNA疫苗的构建及其免疫应答[J];中国农业科学;2006年05期
10 马苏;李玉峰;段舒怡;姜平;;猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白单克隆抗体的制备及生物学特性分析[J];畜牧与兽医;2007年04期
11 罗咏梅;罗小妹;刘才根;何后军;;应用RT-PCR检测猪粪便中PRRSV[J];动物医学进展;2007年S1期
12 曹宗喜;潘全会;张原江;常智杰;罗玉均;何逸民;孔留五;秦宏阳;张桂红;;猪繁殖与呼吸综合征病毒各结构蛋白的融合表达[J];中国预防兽医学报;2009年02期
13 尹国友;孙婕;黄保续;;猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的克隆与原核表达[J];动物医学进展;2009年12期
14 刘萍;陈苗苗;乔莉萍;王凡;刘学荣;牟克斌;黄银君;;猪繁殖与呼吸综合征病毒致病机理的研究进展[J];中国畜牧兽医;2010年01期
15 王林;吴发兴;吴美芹;高许雷;李平;朱紫祥;张燕霞;张志;李晓成;单虎;;PRRSV和PCV-2二重PCR检测方法的建立及初步应用[J];动物医学进展;2010年06期
16 连海;刘志俊;高丰;金洪涛;王泽;张中洋;夏志平;;多克隆抗体对猪繁殖与呼吸综合征的防治效果[J];中国生物制品学杂志;2010年07期
17 祝秀梅;刘学荣;牟克斌;;实时荧光定量PCR在猪繁殖与呼吸综合征病毒研究中的应用[J];生物技术通报;2010年08期
18 刘金彪;彭大新;吴艳涛;高崧;刘秀梵;;猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体的研制[J];畜牧与兽医;2010年04期
19 沈宪文;李月红;王晓莉;宋德武;宣华;王贵平;母连志;丁壮;;猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株分离鉴定及遗传变异分析[J];中国兽医学报;2010年11期
20 刘准;王凤雪;武华;;猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白研究进展[J];动物医学进展;2010年12期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 徐引弟;王治方;张青娴;焦海燕;郭成留;;猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株与普通株二重RT-PCR鉴别方法的建立与应用[A];中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第六届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2008年
2 希尼尼根;程安春;汪铭书;陈孝跃;文明;周伟光;郭宇飞;陈斌;贾仁勇;;猪繁殖与呼吸综合征病毒四川分离株ORF5基因的克隆及序列分析[A];中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第七次学术研讨会论文集[C];2004年
3 邓雨修;李玉峰;姜平;蒋文明;汤景元;;不同引物RT-PCR方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的比较研究[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集(上)[C];2005年
4 朱连德;;猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异和疫苗免疫保护[A];中国猪业发展大会暨中国畜牧业协会猪业分会第二届会员代表大会论文集[C];2007年
5 周艳君;安同庆;薛强;仇华吉;刘金霞;王云峰;田志军;彭金美;童光志;;猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的表达及其单克隆抗体的制备[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年
6 梁大明;;关于防控猪繁殖与呼吸综合征的反思[A];中国畜牧兽医学会养猪学分会2009年学术年会“回盛生物”杯全国养猪技术论文大赛论文集[C];2009年
7 李俊;王金宝;张祯涛;周顺;;猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)分子生物学研究进展[A];山东畜牧兽医学会养猪专业委员会第一届学术研讨会论文集[C];2007年
8 周婷;曾三杰;文心田;肖驰;;猪繁殖与呼吸综合征病毒重庆株的分离鉴定[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集(上)[C];2005年
9 赵永刚;王志亮;王君玮;萨仁高娃;陈继明;童光志;;我国猪繁殖与呼吸综合征的流行现状与研究现状[A];中国畜牧兽医学会2006学术年会论文集(下册)[C];2006年
10 李志杰;丁壮;高恩鹏;;猪繁殖与呼吸综合征病毒JL/07/SW株的分离鉴定及变异分析[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 高志强;猪繁殖与呼吸综合征病毒全基因组分子遗传特征分析[D];中国农业大学;2003年
2 仇华吉;猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-la株基因组解析及其囊膜蛋白结构与功能分析[D];东北农业大学;2001年
3 周艳君;猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定[D];东北农业大学;2005年
4 薛强;猪繁殖与呼吸综合征病毒双基因多组合DNA疫苗的构建及其免疫效力评价[D];中国农业科学院;2003年
5 唐勇;猪伪狂犬病鉴别诊断研究与猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组序列的测定[D];华中农业大学;2004年
6 田志军;表达PRRSV GP5蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其免疫效力的研究[D];东北农业大学;2005年
7 蒲静;PRRSV对猪肺泡巨噬细胞天然免疫功能影响的分子机制[D];中国农业大学;2005年
8 贺云霞;应用RNAi技术抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的研究[D];中国农业科学院;2006年
9 磨美兰;PRRSV感染对猪肺泡巨噬细胞外源性抗原加工递呈功能的影响[D];中国农业大学;2005年
10 熊成龙;中国狂犬病毒的遗传学特征[D];中国人民解放军军事医学科学院;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 高君;重庆地区猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株的分子遗传与变异分析[D];西南大学;2009年
2 邵蕾;猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体的制备及初步应用[D];吉林农业大学;2007年
3 周盛华;快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫胶体金诊断试纸条的研制[D];东北农业大学;2008年
4 袁婧;猪繁殖与呼吸综合征直接免疫荧光诊断方法的建立及其应用[D];东北农业大学;2008年
5 郭海龙;猪繁殖与呼吸综合征病毒感染猪体内细胞因子与病毒的定量检测[D];中国农业科学院;2002年
6 安同庆;利用噬菌体展示技术鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原表位[D];中国农业科学院;2004年
7 刘伍梅;PRRSV感染Marc-145细胞的病毒形态发生学、细胞超微结构变化及细胞凋亡的研究[D];四川农业大学;2005年
8 鲁韦韦;猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立[D];南京农业大学;2008年
9 王娜;猪繁殖与呼吸综合征病毒感染细胞的差异蛋白组学研究[D];福建农林大学;2009年
10 崔盟;猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的间接ELISA检测方法的建立及初步应用[D];扬州大学;2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 凹凸;人体十大遗传特征[N];大众卫生报;2001年
2 ;猪的行为与饲养管理[N];中国畜牧兽医报;2006年
3 钟牧;猪的行为与饲养管理[N];陕西科技报;2006年
4 ;猪的行为与饲养管理[N];中国畜牧兽医报;2006年
5 ;猪的行为与饲养管理[N];中国畜牧兽医报;2006年
6 ;猪的行为与饲养管理[N];中国畜牧兽医报;2006年
7 奇云;高科技催生设计婴儿[N];华夏时报;2002年
8 李建平;我首例荧光转基因克隆猪,又“生”两头荧光猪崽[N];新华每日电讯;2008年
9 曲国斌 林小春 钱铮;克隆前景喜忧参半[N];西藏日报;2003年
10 余志平;关键在于其遗传特征及SCC mec组分[N];中国医药报;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978