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茶树菇、鹿角炭角菌和砖红绒盖牛肝菌凝集素纯化及其免疫调节活性的研究

刘庆洪  
【摘要】: 从茶树菇(Agrocybe cylindracea)子实体中,纯化到了一个分子量31.5kDa,由两个分子量分别为16.1kDa和15.3kDa的亚基组成的凝集素ACL。子实体研磨抽提后,以(NH_4)_2SO_4沉淀得到粗提物。粗提物用DEAE-纤维素阴离子交换柱层析,以10mmol/L Tris-HCl(pH 7.4)缓冲液洗脱,凝集素组分在10mmol/L Tris-HCl(pH 7.4)+150mmol/L NaCl洗脱下来。再以SP-Sepharose阳离子交换柱层析,以10mmol/L NH_4OAc(pH 4.5)+1mol/L NaCl进行线性洗脱,凝集素组分在10mmol/L NH_4OAc(pH 4.5)+0.19mol/L NaCl时洗脱下来。从0.05mol/L NaOH和0.025mol/L HCl开始,其活性受到抑制。菊糖和乳糖抑制其凝集活性。55℃以上其活性受到抑制。AlCl_3和FeCl_3则表现出一定的促进其凝集活性的现象。用悬滴蒸发方法,得到了茶树菇凝集素的结晶,X-光衍射分辨率达到了2.36(?)。茶树菇凝集素对于小鼠脾细胞的有丝分裂也呈现出一定的促进作用。 从鹿角炭角菌(Xylaria hypoxylon)子实体中,纯化到了一个分子量29kDa,由两个相同分子量为14.4kDa亚基组成的凝集素。子实体研磨抽提后,以(NH_4)_2SO_4沉淀得到粗提物。粗提物用DEAE-纤维素阴离子交换柱层析,以10mmol/L PB(pH 7.5)缓冲液洗脱,凝集素组分在10mmol/L PB(pH 7.5)+150mmol/L NaCl时洗脱下来。再以CM-纤维素阳离子交换柱层析,以10mmol/L NaAc-HAc(pH5.4)进行线性洗脱,凝集素组分不吸附。Sephadex G-75凝胶过滤得到电泳级纯的凝集素。鹿角炭角菌凝集素的生化性质分析,从0.05mol/L NaOH和0.05mol/L HCl开始,其活性受到抑制;菊糖和木糖抑制其凝集活性:45℃以上其活性受到抑制。Mg~(2+)、Zn~(2+)和Mn~(2+)抑制凝集素活性,Al~(3+)和Fe~(3+)促进其凝集活性。鹿角炭角菌凝集素XHL对于肉瘤S-180实体瘤的生长抑制率为49.84%,对肝癌H-22实体瘤的生长抑制率为74.13%。荷瘤小鼠腹腔注射XHL后,在一定程度上延长了小鼠的存活时间,减缓了荷瘤小鼠体重的增加速度,同时提高了和抗肿瘤相关的白细胞介素2、肿瘤坏死因子-α和干扰素-γ的分泌量。 从砖红绒盖牛肝菌(Xerocomus spadiceus)子实体粗提物中,经过DEAE-纤维素阴离子交换层析、Affi-gel blue gel亲和层析、CM-纤维素阳离子交换层析和Superdex 75 FPLC凝胶过滤,纯化了砖红绒盖牛肝菌凝集素。该凝集素在DEAE-纤维素和Affi-gel blue gel上不吸附,在CM-纤维素上吸附。其凝集活性在80℃时被完全抑制;5mmol/L ZnCl_2、10mmol/L FeCl_3使其凝集活性提高了1倍,10mmol/L AlCl_3提高其凝集活性3倍;0.03mol/LHCl和0.05mol/L NaOH降低其凝集活性;菊糖抑制其凝集活性。砖红绒盖牛肝菌凝集素促进小鼠脾细胞有丝分裂,比空白对照增加了大约4倍。


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