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蛋用型鸡J亚群禽白血病病毒gp85基因克隆及表达载体的构建

余春明  
【摘要】: J亚群禽白血病病毒属于反转录病毒禽白血病/肉瘤病毒群。该病毒是由英国Dr.Payne于1991年在肉鸡上发现的,该病毒引起的J亚群禽白血病给世界上许多国家的养鸡业带来了巨大的经济损失。十多年来未见蛋用型鸡自然发生该病的报道。2002年,中国农业大学徐镔蕊教授首次发现蛋用型鸡可以自然感染ALV-J。研究表明蛋用型鸡发生J亚群禽白血病时,死亡率达到10%,产蛋量只有60-70%,该病严重影响蛋用型鸡的生产。本研究根据ALV-J的原型株HPRS-103gp85基因序列设计一对特异性引物,对已经鉴定为ALV-J感染发病的蛋用型鸡的病料提取RNA,进行RT-PCR,扩增出完整的ALV-Jgp85基因片段,将此片段克隆进T载体。测序并与ALV-J原型株HPRS-103以及国内外其它毒株ALV-Jgp85基因序列比较,与HPRS-103的同源性为93.7%,与其它各毒株的同源性在92.1-94.3%之间(与AF88为88.7%);同时推导gp85氨基酸同源性,与HPRS-103的同源性为89.3%,与其它毒株的同源性在87.3-90.9%之间。这表明蛋用型鸡ALV-Jgp85发生了变异,系统进化树表明蛋用型鸡ALV-Jgp85与河南HN0001更为近源。 ALV-J亚群特异性是由env基因编码的表面囊膜蛋白gp85决定的,为得到含ALV-Jgp85基因的亚组病毒,将pT-gp85以及转移质粒pMelBac C经EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ双酶切,定向将ALV-Jgp85基因插入到pWelBac C,构建重组转移载体。用该重组转移载体质粒与线性化的杆状病毒DNA共转染Sf9细胞,经PCR鉴定,成功获得重组病毒。本研究结果为在昆虫细胞高效表达出针对诊断蛋用型鸡ALV-J感染的诊断抗原蛋白奠定了基础,具有重要的潜在应用前景。


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