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单细胞凝胶电泳诱变检测系统的研究及应用

闵海涛  
【摘要】: 本研究将细胞培养和单细胞凝胶电泳结合起来建立了单细胞凝胶电泳诱变检测系统,并用该检测系统检测兽药添加剂喹烯酮和喹乙醇对DNA的损伤程度。并基于阳性致突变物H_2O_2作用于非洲绿猴肾Vero细胞引起细胞DNA损伤的原理,研究了其关键步骤-裂解时间,以9.1~273μmol/L剂量的H_2O_2染毒处于对数生长期的Vero细胞3h后,收获细胞用于制备三明治凝胶板,分别裂解1h、2h、3h和4h并选择最适裂解时间。裂解后的细胞进行解旋与电泳、中和、DNA染色和荧光检测,通过分析彗星样细胞发生率和彗尾的长短等指标,证明裂解时间以2~3h为宜。 应用建立的单细胞凝胶电泳诱变检测系统检测喹烯酮和喹乙醇对DNA的损伤程度。喹烯酮染毒剂量在1~5μg/ml时细胞存活率>85%,以1~5μg/ml剂量的喹烯酮染毒处于对数生长期的Vero细胞,后经过电泳,通过分析彗星样细胞发生率和彗尾长短等指标,结果表明染毒剂量在2μg/ml对DNA造成中度损伤。喹乙醇染毒剂量在2~10μg/ml时细胞存活率>90%,以2~10μg/ml剂量的喹乙醇染毒处于对数生长期的Vero细胞,后经过电泳,通过分析彗星样细胞发生率和彗尾长短等指标,结果表明染毒剂量在6μg/ml对DNA造成中度损伤。本试验表明喹烯酮和喹乙醇具有致突变作用。 本论文首次将细胞培养技术和单细胞凝胶电泳结合起米应用于检测兽药对DNA的损伤,并对该方法中的一些关键技术条件进行了研究,为兽药安全评价体系的更新提供了一定的技术贮备。


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