小麦杂交种与亲本之间差异表达EST的克隆和鉴定

【摘要】： 许多研究表明，在杂种优势形成的过程中，杂交种与亲本之间的基因表达发生显著的变化。为了更深入探讨小麦杂种优势形成的分子机理，需要对这些差异表达基因进行研究。本文以3338／京冬6号组合为材料，采用cDNA—AFLP技术对拔节期叶片和根、抽穗期旗叶、授粉后6天和授粉后12天的正反杂交的种子中差异表达基因进行了探讨与研究，取得主要结果如下： 1．在拔节期叶片和根、抽穗期旗叶、授粉后6天和授粉后12天的正反交种子中回收差异表达片段1001条，并按照差异表达图谱对各种差异表达类型与杂种优势的关系进行了探讨，结果表明：1)不同时期，各种差异表达类型在总的差异表达基因片段中所占的比例不同。2)随着生育期的不同，各种差异表达类型所占比例的变化趋势也不尽相同。3)各生育期各组织中差异表达基因片段在总的差异表达片段所占的比例不同，这说明各生育期各组织中基因差异表达情况有所不同。 2．应用反向Northern技术，对抽穗期旗叶的160个差异表达片段进行验证，发现86条呈现表现真实差异，并对其中32个片段进行克隆测序分析，结果表明其中22个cDNA片段与已知功能的基因有较高的同源性，相应基因与多个生理生化途径有关：包括糖代谢(1个)、脂类代谢(3个)、蛋白质代谢(2个)、氨基酸代谢(2个)、调控蛋白(1个)、物质运输(1个)、能量转换(4个)、信号转导(5个)、贮藏蛋白(1个)、细胞骨架系统(1个)、细胞分裂周期(1个)。此外还有10条cDNA片段功能未知。 3．利用电子克隆获得了14-3-3蛋白基因完整的开放阅读框(ORF)