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具有粘附性双歧杆菌的筛选及相关特性研究

潘伟好  
【摘要】:本课题以双歧杆菌作为研究对象,就粘附性菌株的筛选、生长特性、粘附特性、抑菌性能及其耐药性与质粒等方面进行了较为系统的研究,以期为优良、安全、高效的食品级双歧杆菌发酵剂及微生态制剂的研制及开发提供理论依据及技术支持。 1.测定了23株双歧杆菌的表面疏水性及对人肠道上皮Caco-2细胞的粘附性,发现同一菌株在疏水性及粘附性上存在着一定的对应关系,说明测定菌株的表面疏水性可作为筛选粘附性双歧杆菌的初筛标准之一。其中菌株H-10、I-6具有较强的粘附性。 2.菌株H-10、I-6经鉴定分别为星状双歧杆菌(Bifidobacterium asteroides)及假小链双歧杆菌(Bifidobacterium pseudocatenulatum)。其生长状况均以改良MRS培养基为最佳,最适生长温度为37℃,最适起始pH值为7.0,培养2小时后进入对数期,12小时进入稳定期,最适接种量分别为3%和2%。 3.受试菌H-10、I-6的粘附作用均受细菌浓度、粘附作用时间的影响,处于稳定期的细菌与Caco-2细胞的粘附作用最强,偏酸性的环境条件能够促进粘附的进行。胰蛋白酶及牛血清白蛋白分别处理双歧杆菌H-10、I-6可导致粘附水平的下降,说明受试菌体表面蛋白质可能是粘附素的主要组成,且粘附过程中有脂磷壁酸的参与。胞外多糖处理菌体后无显著影响。使用胰蛋白酶、过碘酸钠及各种糖对Caco-2细胞处理后,发现Caco-2细胞的粘附素受体可能为糖蛋白结构,乳糖、鼠李糖及甘露糖能显著地降低受试菌株H-10、I-6的粘附,提示了粘附素受体中可能有与上述三种糖结构相似的糖结构。受试菌经80℃水浴加热30min及20W紫外线照射30min分别灭活后,其粘附作用均显著下降,证明粘附素不耐热且对射线具有敏感性。 4.通过与致病菌的共培养试验以及抑菌试验发现,双歧杆菌H-10、I-6对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌均具有显著的抑制性,主要通过其代谢产物中的有机酸来发挥其抑菌性能。通过测定乳酸脱氢酶以衡量细胞膜的受损程度,初步证明受试菌与致病菌对细胞的作用具有本质上的区别,能减缓金黄色葡萄球菌及大肠杆菌对细胞造成的损害。 5.以金黄色葡萄球菌ATCC 25923为质控菌,检测了双歧杆菌H-10、I-6对38种抗菌药物的药敏性。结果显示,受试菌H-10对青霉素类、喹诺酮类、氨基糖甙类、多肽类、磺胺类、四环素类、呋喃类抗菌药物表现出耐药性,对头孢类、大环内酯类、氯霉素、利福平、克林霉素、磷霉素则表现出敏感性或中度药敏性。I-6对青霉素类、喹诺酮类、氨基糖甙类、多肽类抗菌药物基本上表现为耐药性,对头孢类、大环内酯类、四环素类、呋喃类、氯霉素、利福平、克林霉素、磷霉素主要表现为敏感性或中度敏感性,对磺胺类则表现出不同的药敏性。受试菌H-10、I-6中未发现有质粒存在,其药敏性不为质粒所编码。


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