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NADPH氧化酶参与盐胁迫诱导的烟草悬浮细胞活性氧的产生

张锦广  
【摘要】:土壤盐渍化严重威胁着农作物的产量。很多研究表明盐胁迫对植物细胞的损伤涉及到活性氧类物质,生长在高盐环境下的植物比正常生长的植物会积累更多的活性氧。目前,盐胁迫下活性氧的来源还不是很清楚,考虑到活性氧在植物逆境下的重要作用,盐胁迫产生活性氧的来源越来越受到人们的重视。先前的研究表明,一种质膜结合的NADPH氧化酶涉及到植物病原物相互作用过程中活性氧的释放,那么,NADPH氧化酶是否参与盐胁迫下活性氧的生成呢? 本研究以烟草悬浮细胞(BY-2)为试验材料,通过不同浓度的NaC1处理,阐明盐胁迫下细胞的生长状况,发现盐胁迫抑制细胞生长,在200mMNaC1下,细胞已经停止生长。苔盼蓝染色表明盐胁迫可以引起细胞死亡,盐胁迫处理24小时引起细胞基因组发生降解。DAB染色和硫酸钛法测定证明盐胁迫可以诱导细胞迅速产生H_2O_2,产生的阶段主要是在前60分钟。通过使用NADPH氧化酶的抑制剂-DPI处理,发现NADPH氧化酶参与盐胁迫诱导细胞活性氧的释放。DCFH-DA荧光染色证明ABA也可以诱导细胞产生H_2O_2,产生的途径可能也是通过NADPH氧化酶,证明ABA信号途径的普遍性。 使用RT-PCR证明NADPH氧化酶基因受盐诱导,Western-blot方法证明NADPH氧化酶基因受盐和ABA的诱导,而在通常状况下NADPH氧化酶的表达很少。利用农杆菌介导的方法获得超表达NADPH氧化酶基因的悬浮细胞,对超表达的细胞进行耐盐性分析,发现超表达的细胞对盐敏感。


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