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猪圆环病毒2型感染对猪免疫功能影响的细胞与分子机制

司兴奎  
【摘要】:猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)被认为是引起猪断奶后多系统衰竭综合征的原发性病原。本研究系统分析了PCV2实验感染猪外周血中单个核细胞亚群、细胞因子mRNA的动态变化,并分析了PCV2感染对猪瘟疫苗免疫效果的影响,旨在从细胞与分子水平揭示PCV2感染对猪免疫功能影响的机制。 建立了IL-2、IL-4、IL-10、IL-12p40、IFN-γ和TNF-α等6种细胞因子的竞争定量PCR(qc-PCR)的标准竞争曲线,并获得相关系数(r~2)均在95%以上的直线回归方程。采用qc-PCR对PCV2感染猪外周血淋巴细胞的细胞因子进行定量分析。结果表明,感染组(n=3)Th1细胞分泌的细胞因子IL-2、IL-12p40和IFN-γ的mRNA整体趋势上均高于对照组(n=2),Th2细胞分泌的细胞因子IL-4和IL-10的mRNA的变化情况却不尽相同。在14和21PI,感染组IL-2和IL-12p40 mRNA含量明显升高;感染组IFN-γ mRNA含量除在7DPI低于对照组外,在28DPI(P0.01)和42DPI(P0.05)均显著高于对照组。IL-4 mRNA在28DPI显著高于对照组(P0.01),而IL-10 mRNA在7DPI(P0.01)和14DPI(P0.05)均显著高于对照组,但在35DPI急剧下降且明显低于对照组(P0.05)。从6种细胞因子mRNA变化提示PCV2感染可造成猪体内Th1/Th2免疫应答的失衡,导致细胞免疫应答功能增高而体液免疫应答下降。 采用血常规方法和三色流式细胞术对PCV2感染猪外周血单个核细胞(PBMC)亚群含量进行了分析。结果表明,感染组B细胞含量在28DPI(P0.01)和35DPI(P0.05)显著下降,单核细胞含量在35DPI(P0.05)显著高于对照组;感染组NK细胞含量在21DPI低于对照组(P0.01);感染组T细胞在21DPI(P0.05)和42DPI均显著升高(P0.05)。对T细胞亚群含量变化的分析结果显示,Tc细胞除在10DPI明显低于对照组外(P0.05),在21DPI(P0.05)、35DPI(P0.05)和42DPI(P0.05)均显著高于对照组;感染组记忆/激活Th细胞含量在10DPI显著减少(P0.05);而感染组幼稚型Th细胞则在21DPI(P0.05)显著升高,随后在28DPI(P0.05)又明显下降。由此表明PCV2感染可降低猪的体液免疫功能,感染初期对机体的特异性细胞免疫功能有一定程度的影响,感染中期猪的非特异性细胞免疫功能明显削弱。 将试验猪分成单独接种猪瘟疫苗组(CSF-V)、PCV2感染组(PCV2)、PCV2感染并出现病毒血症后接种猪瘟疫苗组(PCV2/CSF-V)和PCV2感染同时接种猪瘟疫苗组(CSF-V/PCV2),采用阻断ELISA检测不同时相血清中猪瘟疫苗抗体。结果表明,在52DPI,CSF-V/PCV2组血清中抗体的阻断值显著低于CSF-V组(P0.05);在42和52DPI,PCV2/CSF-V和CSF-V/PCV2组猪瘟抗体效价均明显低于CSF-V组,且在52DPI,CSF-V组抗体阳性率达100%,而PCV2/CSF-V和CSF-V/PCV2的抗体阳性率仅为67%。由此表明,PCV2感染可在一定程度上抑制猪瘟疫苗免疫的抗体反应,从而影响猪瘟疫苗的免疫效果。 综上结果表明,PCV2感染可导致猪体内Th1/Th2细胞分泌的细胞因子失衡,并降低B细胞含量而减弱机体的体液免疫应答水平,同时对猪的非特异性免疫功能也产生一定影响,使感染猪的整体免疫功能受到抑制。


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