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一氧化氮与雏鸡柔嫩艾美耳球虫感染的互作关系

李金贵  
【摘要】:采用分光光度法测定了雏鸡感染E.tenella后盲肠粘膜iNOS的活性变化。测定结果表明,在感染后不同时间雏鸡盲肠粘膜的iNOS 活性不同,于96h 达峰;在所设的7 个剂量组中,在0.5×104~2.5×104个卵囊/只的感染剂量范围内,盲肠粘膜iNOS 活性具明显的剂量-效应关系,其中以2.5×104个卵囊/只剂量组活性最高;但感染剂量在等于或高于3.0×104 个卵囊/只时,活性开始下降。 采用NADPH-d 组织化学法研究雏鸡感染E.tenella 后NOS 在盲肠和脾脏中的分布与表达情况。试验结果表明,所有正常雏鸡盲肠粘膜下层和肌层均有较深的着色,根据以往的资料和NOS 的表达特性初步判断为nNOS;试验雏鸡在感染E.tenella 后第3~5d 盲肠粘膜上皮细胞和肠腺上皮细胞也有较深的着色,并从第7d 开始着色减弱;而对照组雏鸡盲肠粘膜上皮细胞和肠腺上皮细胞以及对照组和试验组雏鸡的脾脏几乎不着色或着色很浅。试验结果提示盲肠粘膜上皮细胞和肠腺上皮细胞的着色可能是iNOS 被诱导表达的结果。 以SNP、Sper/NO 和GSNO 作为NO 供体处理E.tenella 卵囊,研究了外源性NO 对卵囊孢子化率及其毒力的影响。试验结果表明,在以上3 种NO 供体中,只有GSNO 对卵囊的孢子化率有明显的抑制作用,其对纯化卵囊的抑制率为93%~97%,对粪便中卵囊的抑制率可达100%; GSNO 还能明显抑制E.tenella 卵囊的毒力,经2~8mmol/L 浓度GSNO 处理的卵囊几乎丧失了对雏鸡的致病力。 以腹腔注射途径给予感染E.tenella 雏鸡LPS 和Dex,用铜离子活化镉还原法检测血清NO_(2-)水平,并通过测定NBT 阳性细胞百分率、雏鸡增重、免疫器官的脏器系数、OPG 值以及盲肠病变记分等指标,探讨了NO 在雏鸡感染球虫过程中的作用。试验结果表明,与空白对照组相比,给予LPS 使NBT 阳性细胞百分率明显升高(p0.01),并使盲肠病变及球虫感染引起的增重下降有所减轻,这提示LPS 对雏鸡具一定的保护作用;而给予Dex 不仅降低了感染雏鸡血清NO2-的水平、NBT 阳性细胞百分率、增重和胸腺的脏器系数,还增加了OPG值和盲肠病变记分,说明在雏鸡感染球虫过程中,Dex 会减少NO 的生成并使雏鸡抗球虫免疫力下降。 本研究还以腹腔注射途径给予E.tenella 感染雏鸡cNOS 抑制剂L-NAME、iNOS 的抑制剂AG 以及NOS 的底物L-Arg,通过雏鸡盲肠粘膜MC 数量和HT 含量变化的测定以及盲肠组织病理学变化的观察,研究了雏鸡感染球虫后,NO 与盲肠粘膜MC 和HT 的相互作用以及NO 在雏鸡感染球虫中的作用。试验结果表明, AG 处理组雏鸡血清NO2-水平最低,但其盲肠HT 含量显著高于其他处理组的雏鸡(p0.01);MC 数量与空白对照组之间无明显差异,但明显高于其他各处理组;免疫对照组雏鸡血清NO_(2-)水平最高,其盲肠MC 数量和HT含量明显高于L-NAME 处理组和L-Arg 处理组的雏鸡;L-NAME 与L-Arg 处理组之间雏鸡血清NO_(2-)水平、盲肠MC 数量和HT 含量均未见明显差异(p0.05)。组织病理学的检查结果表明,AG 和L-NAME 处理组雏鸡的盲肠组织内可见大量各发育阶段的球虫,而L-Arg


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