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山茶花粉超低温保存研究

李广清  
【摘要】:本文对20个种(品种)的山茶花粉进行了超低温保存及超低温保存后山茶花粉细胞结构及生理生化变化进行了研究。通过试验,确定了适宜山茶花粉超低温保存的技术程序,并且对超低温保存的机理进行了探索。研究表明: 1.山茶花粉可以实现超低温冷冻的长期保存。本试验中所使用的20个种(品种)的山茶花粉经液氮保存13—20个月后,仍能保持较高的萌发率,平均萌发率为53.2%,花粉萌发的相对保持率在62%以上。田间授粉结实率与当年新鲜花粉相比差异很小。 2.花粉材料的特性对花粉寿命的影响较大。在开花前1—2天或开花当天对山茶花粉进行采集,略作阴干处理后进行携带,可以确保获得良好的保存材料。 3.温度是影响花粉寿命的另一个重要因素。本研究表明,保存温度越低,山茶花粉的寿命越长,超低温冷冻保存是实现山茶花粉长期保存最有效的途径。 4.花粉的含水量是影响超低温保存效果的主要因素。本试验所确定的山茶花粉超低温保存的适宜含水量范围为15—23%。采用室温下自然干燥法或干燥皿进行干燥,对保存材料进行脱水处理都是比较适宜的,但要避免强光照射。 5.采用-30℃预冻30分钟后再投入液氮中保存,显示出了明显的预冻效果,提高了超低温保存后山茶花粉的萌发率。 6.采用37℃温水快速化冻方式或采用冰水化冻的方式,均能保持较好的超低温保存效果。 7.山茶花粉超低温保存后膜透性及膜脂过氧化程度的变化趋势是:相对电导率及MDA和O_2~-含量在保存的前期升高,随着保存时间的延长,又出现了下降趋势,但仍高于保存前。说明山茶花粉在超低温保存过程中发生了一定程度的膜脂过氧化作用。 8.山茶花粉超低温保存后抗氧化酶类的变化趋势是:在保存24hr后SOD酶活性增强最快,之后增幅变小,当保存至1年时,活性有所减弱,但仍高于保存前。POD酶活性则随着保存时间的延长逐渐增强,但前期增强快,后期增强慢。 9.山茶花粉超低温保存过程中物质代谢的变化趋势是:可溶性糖及可溶蛋白的含量随着保存时间的延长逐渐升高,游离脯氨酸含量的变化不明显。


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