油松胚珠游离核分裂期miRNA的克隆与初步鉴定

【摘要】： MiRNA是一类进化上保守的非编码小分子RNA,长度约为22nt,不仅具有器官特异性,而且可以在器官发育的特定时期表达。miRNA作为一种新型的调控小RNA,在生物体生长发育的调控中发挥着极其重要的作用。 为研究miRNA与油松胚珠发育的相关性,本研究选择4月初游离核分裂时期的油松胚珠,用直接克隆法和生物信息学方法对油松胚珠miRNA进行初步研究,得到结果： 1.以油松胚珠为材料,用SDS法,Trizol法和CTAB法及改良的SDS法对其总RNA提取,以ND-2000紫外分光光度计测OD值和琼脂糖凝胶电泳检验提取效果。结果表明：改良的SDS法提取的RNAA260/A280为1.974,A260／A230为2.082,28S亮度是18S的2倍,完整性好,可进行后续的分子生物学实验。 2.经过对小RNA的富集、电泳分离、小RNA的回收、小RNA克隆等实验技术进行优化及验证,构建了小分子RNA的cDNA文库,建立了成熟的油松胚珠小RNA克隆技术。 3.利用DNAMan处理所得序列及检索NCBI中的EST数据库,得到8个与数据库匹配的小RNA序列,通过用Mfold软件对其前体进行二级结构的预测,得到2个候选的miRNA,分别命名为miRNA-c1、miRNA-c2。