收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

力达霉素产生菌中atrA同源基因的克隆及其功能的初步研究

李光伟  
【摘要】:力达霉素(lidamycin)是一种新型的烯二炔类抗肿瘤抗生素,又名C-1027,由球孢链霉菌C-1027 (S. globisporus C-1027)产生。其分子由一个酸性辅基蛋白和一个烯二炔结构的发色团非共价结合组成。力达霉素生物合成基因簇已被克隆,其中至少存在sgcR1、sgcR2、sgcR3、sgcR、sgcM五个基因为可能的调控基因。但是,在力达霉素生物合成基因簇外尚未发现调控力达霉素生物合成的基因。2005年,人们首先在天蓝色链霉菌基因组中发现atrA基因(atrA-c),它位于四种已知抗生素生物合成基因簇的外部,其表达蛋白AtrA能够特异性调控actll-orf4的转录,使放线紫红素的产量升高。此后,人们陆续在灰色链霉菌和阿维链霉菌中也发现了atrA的同源基因,均位于抗生素生物合成基因簇之外,并且分别对链霉素和阿维菌素的生物合成有正调控和负调控作用。以上这些研究激发了我们从力达霉素产生菌S. globisporusC-1027基因组中寻找atrA同源基因的兴趣。 本工作首先在球孢链霉菌C-1027中异源表达天蓝色链霉菌的AtrA蛋白(AtrA-c),结果显示AtrA-c可能对力达霉素的生物合成起调控作用。然后,通过PCR扩增得到了球孢链霉菌C-1027 atrA的全序列以及该基因上下游的旁侧序列。同源性分析显示,C-1027 AtrA蛋白与天蓝色链霉菌AtrA蛋白在286个氨基酸范围内一致性为65%,相似性为70%;与灰色链霉菌AtrA蛋白在269个氨基酸范围内的一致性为87%,相似性为89%;与阿维链霉菌AtrA蛋白在256个氨基酸范围内的一致性为71%,相似性为78%。为了研究atrA在体内的生物学功能,本实验采用同源重组双交换的方法将atrA基因阻断。根据atrA全序列以及该基因上下游的旁侧序列,PCR扩增了用于阻断atrA的前臂atrAAB和后臂atrACD。然后以携带阿普霉素抗性基因的温敏型质粒pKC1139为载体,构建了阻断atrA的阻断质粒pKC-atrAAt1c。该质粒包含atrA基因上游和下游两侧的片段,并在两片段中间插入硫链丝菌素抗性基因片段(tsr)作为筛选标记。将重组质粒通过接合转移的方法从大肠杆菌E. coli ET12567/pUZ8002转移至S. globisporus C-1027。通过温度和抗性双重筛选得到了具有硫链丝菌素抗性(Thior)而对阿普霉素敏感(Ams)的接合子,为可能发生了同源双交换的接合子。利用PCR和Southern blot的方法对其进行验证,最终获得了发生同源双交换的突变株。将atrA阻断的突变菌株命名为S. globisporus atrAKO。对野生株、阻断株进行生物活性测定,结果表明阻断株S. globisporus atrAKO产生的抑菌圈在96 hr、120 hr和144 hr均明显小于S. globisporus C-1027产生的抑菌圈。以上结果初步证明了atrA在球孢链霉菌C-1027中对力达霉素的生物合成具有正调控作用。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 李卓荣;李电东;;致力于抗肿瘤药物研究的甄永苏院士[J];食品与药品;2010年03期
2 王飞;MD技术知识[J];信息记录材料;1998年03期
3 王婴 ,书友;鞋王和他的儿女们[J];西部皮革;2005年01期
4 刘荣生;小型磁光盘(MD)系统[J];信息记录材料;1999年02期
5 桑国卫;国际医药产业发展特点与我国创新药物研究近况[J];齐鲁药事;2005年01期
6 岁丰;新型声频系统:数字唱片和小型数字盒式磁带[J];管理科学文摘;1994年05期
7 ;如何购买MP3播放器[J];微电脑世界;2004年20期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
11 ;[J];;年期
12 ;[J];;年期
13 ;[J];;年期
14 ;[J];;年期
15 ;[J];;年期
16 ;[J];;年期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 甄红英;李映;姚成;;力达霉素抑制小鼠胚胎干细胞肿瘤自我更新能力的研究[A];2011医学科学前沿论坛第十二届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2011年
2 张蕾;闫艳;曹戟;钟理科;朱狄峰;楼剑书;杨波;何俏军;;Sumo-1 Regulates Retinoic Acid Receptor a (RARa) and its Potential Role in All-Trans Retinoic Acid (ATRA)-induced Cell Differentiation[A];2011医学科学前沿论坛第十二届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2011年
3 甄红英;王淑玲;;力达霉素抑制肿瘤干细胞的作用机制研究[A];2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2009年
4 封云;邵荣光;任开环;李保卫;张征仙;;力达霉素抗Ⅳ型胶原酶Fab'片段偶联物抗肿瘤侵袭转移作用[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
5 王真;何琪杨;梁云燕;王代树;李电东;;力达霉素高活性地引起肿瘤细胞死亡的分子机制[A];2002全国青年药理学英文学术会议论文汇编[C];2002年
6 许洪志;黄敏;隋潇徽;刘新;李颖;王相华;于桂兰;王欣;;急性早幼粒细胞白血病治疗的研究[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
7 刘少军;李曼;丁峰;顾勇;林善锬;;一步提取法测定全反式维甲酸[A];“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编[C];2004年
8 李兴起;张胜华;欧阳志钢;甄永苏;;力达霉素抑制神经胶质瘤血管拟态和促细胞凋亡[A];2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2009年
9 景慧;方艳芬;周星露;罗沛华;李琳;杨波;何俏军;;CDK2的泛素化降解及其在全反式维甲酸(ATRA)诱导白血病细胞分化调控中的作用研究[A];2011医学科学前沿论坛第十二届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2011年
10 王甦;刘云鹏;候科佐;张敬东;王妍;;MAPK信号转导系统在ATRA诱导分化过程中的作用[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 茹琴;细胞穿透肽(Arg)_9与力达霉素强化融合蛋白的构建及其抗肿瘤活性研究[D];中国协和医科大学;2010年
2 韩菲菲;力达霉素对卵巢癌抑制作用及联合Hsp90抑制剂格尔德霉素及其衍生物的协同作用研究[D];中国协和医科大学;2010年
3 陈磊;Rig-I负调控AKT通路参与ATRA和IFNα合用诱导U937细胞增殖抑制、分化、凋亡和周期阻滞[D];西北农林科技大学;2010年
4 龚敏;视黄酸核受体β介导的ATRA对骨髓间充质干细胞成神经分化促进作用的实验研究[D];重庆医科大学;2012年
5 陈昌国;1.AP-2α抑制IFNGR1影响肿瘤细胞IFN-γ敏感性 2.ATRA影响ICAM-1糖基化的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2012年
6 付劲蓉;ATRA诱导HL-60细胞产生MDR的相关基因筛选与克隆[D];重庆医科大学;2003年
7 孙德福;鞘脂代谢物对维甲酸类药物肿瘤抑制过程中的影响[D];山东大学;2012年
8 张睿;KLF4在全反式维甲酸诱导线粒体融合蛋白2表达中的作用及机制研究[D];河北医科大学;2010年
9 方艳芬;全反式维甲酸与蛋白酶体抑制剂联合诱导急性髓性白血病细胞分化和凋亡作用及分子机制研究[D];浙江大学;2011年
10 史建红;维甲酸受体α在全反式维甲酸调节血管平滑肌细胞KLF4表达中的作用及机制研究[D];河北医科大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李光伟;力达霉素产生菌中atrA同源基因的克隆及其功能的初步研究[D];北京协和医学院;2009年
2 李映;低剂量力达霉素诱导小鼠胚胎癌细胞分化的研究[D];吉林大学;2012年
3 曾德叶;急性早幼粒细胞白血病233例临床资料回顾性分析[D];福建医科大学;2011年
4 马国燕;ATRA调节血管平滑肌细胞中KLF4表达的分子机制[D];河北医科大学;2011年
5 闫艳;Nutlin-1协同全反式维甲酸(ATRA)诱导白血病细胞分化的作用及其机制研究[D];浙江大学;2012年
6 刘景;ATRA联合奈达铂对人肝癌细胞株Huh-7增殖与凋亡的影响[D];南昌大学;2011年
7 陈斯;全反式维甲酸和TGF-β 1协同调节KLF4表达及促进血管平滑肌细胞分化的分子机制[D];河北医科大学;2012年
8 蔡倩;HSP90β在ATRA诱导的白血病细胞株HL60耐药中的作用研究[D];重庆医科大学;2010年
9 曹振平;VPA联合ATRA抑制子宫颈癌细胞增殖的分子机制研究[D];安徽医科大学;2011年
10 杨威;ATRA诱导下MSCs在损伤肺组织的招募及对MMP-9 mRNA的影响[D];重庆医科大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;支持ATRAC3/ATRAC3plus/MP3的便携式CD机[N];中国计算机报;2003年
2 赵欣;通吃MP3及ATRAC3格式[N];中国计算机报;2004年
3 四川 李建;索尼的ATRAC3+压缩技术简介[N];电子报;2004年
4 National;对MP3重拳反击——Hi-MD[N];电脑报;2004年
5 sadeness;MD是怎样炼成的[N];电脑报;2001年
6 本报记者 刘晖;撼动移动音乐技术格局[N];计算机世界;2004年
7 《i周刊》记者 赵欣;和MP3对抗到底 索尼MZ-NH1 Hi-MD随身听[N];中国计算机报;2004年
8 ;索尼MZ-NH1 Hi-MD试用手记[N];电脑报;2004年
9 宁小平;Hi-MD 扑面而来 高档MP3遭遇空前挑战[N];中国计算机报;2004年
10 高山南;Mini Disc革新与改变[N];中国计算机报;2002年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978