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野生树鼩病毒自然感染调查及普通级实验树鼩病毒监测指标的研究

王新兴  
【摘要】:树鼩是一种形似松鼠的小型哺乳动物,分类地位介于原始食虫类与原始灵长类之间,独立称之为攀鼩目。由于其具有体积小,比较容易饲养和操作,管理方便,繁殖力高,廉价经济等优点,树鼩存在多种自发性疾病,也报道建立多种病毒感染模型的尝试,而且其进化程度高,新陈陈谢和大体解剖与人较为接近,因此其作为较理想的实验动物,已经被广泛地应用于医学与生物学的研究中。在病毒学方面,树鼩不但被用作疱疹病毒、腺病毒、EB病毒、甲型和乙型肝炎病毒、轮状病毒的研究,而且还用于流感病毒、丙型和丁型肝炎病毒、基孔肯雅病毒等研究。但目前大多数研究使用的是野生树鼩,自然携带病毒尚不清楚,实验动物的质量难以保证,用于科学研究的树鼩由于自身感染的病原菌不清楚,而且许多情况下这些病原菌对试验又存在干扰,所得到实验数据的科学性、准确性、可重复性等问题有待商榷。要将树鼩更广泛地运用于生命科学和医学研究,急需解决树鼩的实验动物标准化问题。 病毒学检测和监测是树鼩实验动物标准化和质量控制的重要内容,而野生树鼩是否携带人兽共患病毒鲜见报道。本研究针对野生树鼩病毒自然感染状况进行调查,摸清树鼩对病毒的易感性,为树鼩在病毒学研究中的应用提供科学依据,并藉此提出普通级树鼩病毒监测指标的研究稿,为制订我国树鼩质量标准提供科学数据。本研究采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,对来源于云南昆明市城郊青龙峡地区的野生树鼩(滇西亚种,Tupaia Belangeri Chinensis)是否携带单纯疱疹病毒、轮状病毒、流感病毒、柯萨奇病毒、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、丁肝病毒、登革热病毒、出血热病毒和麻疹病毒等11种常见病毒进行筛查。 结果表明,在已筛查的60只野生中缅树鼩中,可检测到单纯疱疹病毒和柯萨奇病毒,其血清抗体阳性比例分别为36.7%(22/60)和1.67%(1/60),而在粪便中仅检测到轮状病毒,其抗原阳性为6.7%(4/60),其它病毒未检测到,初步显示了野生树鼩自然状态下携带病毒的状况。而单纯疱疹病毒、柯萨奇病毒和轮状病毒均为人兽共患病,不仅会影响动物的生命健康、干扰实验结果的可信性,而且可能危害实验动物从业人员的健康和安全。为此,建议将单纯疱疹病毒、柯萨奇病毒和轮状病毒列为普通级树鼩病毒质量控制的首检项目,进一步大样本的筛查将显示是否将其它病毒列为必检项目。 柯萨奇病毒是目前国内引起手足口病的主要病原体,近来年手足口病在儿童中的流行已成为备受关注的公共卫生问题,研究针对病毒的疫苗对保卫公共健康和安全具有重要意义,由于野生树鼩自然状态下可能携带柯萨奇病毒,且树鼩对柯萨奇病毒的易感性问题尚未见报道,因此,本研究使用柯萨奇病毒A组16型这一标准毒株对树鼩进行感染,研究柯萨奇病毒对树鼩感染性及致病机理,并建立一种更方便快捷的检测方法,为建立柯萨奇病毒的树鼩动物模型打下基础。 根据实验动物管理的相关规定,尽快制定出实验树鼩的质量标准,严格规范其生产、流通及使用,并使之纳入实验动物许可证的有效监控和管理,已经成为迫在眉睫的工作,本研究在通过对野生树鼩病毒携带状况的调查基础上,同时参阅以往所做过的工作,文献报道以及其他实验动物的国家标准,也就野生树鼩在实验动物标准化过程中的病毒检测指标进行了初步的研究,为制订我国树鼩质量控制标准提供科学数据,对树鼩实验动物化过程中的相关国家标准的制定有非常重要的意义。


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