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淫羊藿有效成分分析及其体内代谢的研究

吴彩胜  
【摘要】:淫羊藿(Epimedii Folium)是小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim.、箭叶淫羊藿Epimedium sagittatum (Sieb.et Zucc.) Maxim.、柔毛淫羊藿Epimedium pubescens Maxim.、巫山淫羊藿Epimedium wushanense T.S. Ying或朝鲜淫羊藿Epimedium koreanum Nakai的干燥叶,具有“补肾阳,强筋骨,祛风湿”的传统功效。现代药理研究表明,淫羊藿能增加心脑血管血流量,改善生殖系统功能,促进造血功能、免疫功能及骨代谢,具有抗衰老、抗肿瘤等功效。淫羊藿化学成分研究表明,其主要成分是异戊烯基黄酮,如淫羊藿苷,宝藿苷Ⅰ等。中国药典也采用测定淫羊藿药材或饮片中的淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ的含量对淫羊藿进行质量控制。 本论文首先建立了一个快速、准确、便捷的高效液相色谱-紫外检测器-傅里叶变换离子回旋共振质谱技术(HPLC-UV/FTICRMS)的方法,对7种不同来源的淫羊藿药材中的黄酮成分进行在线分析检测,得到了这些化合物准分子离子的高分辨质量数,测定精确质量数准确度均小于2 ppm,并通过采用Data Dependent Scan模式获得准分子离子峰的多级质谱碎片的数据。通过准分子离子的高分辨数据计算了其分子组成,并结合多级碎裂质谱碎片的数据及淫羊藿异戊烯基黄酮的质谱裂解规律,鉴定和推测了淫羊藿药材中68种黄酮成分的结构。通过高分辨质谱提取离子流获得的峰面积数据,明确了这68种淫羊藿黄酮成分中最主要的黄酮成分。接着通过高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)技术,对7个主要淫羊藿黄酮成分(朝藿定A,B,C,淫羊藿苷,2"-O-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ,箭藿苷B和宝藿苷Ⅰ)进行定量分析,一共分析了35个不同来源不同产地的淫羊藿药材。采用主成分分析(PCA)方法和聚类分析方法分别对定量分析结果进行了统计学处理。通过PCA分析构建了一个综合评价函数,结果表明该评价函数不但可以反映总黄酮含量的高低,而且可以反映不同黄酮成分相对含量的变化,是一个具有前景的中药材质量评价方法。聚类分析表明,不同来源淫羊藿药材按照黄酮含量的高低可以分为低、中、高三个组,分类结果与综合评价函数所得结果一致。实验结果表明在质量评价上,应该采用多成分同时定量的方法评价淫羊藿的质量,并选择合适的统计处理方法,构建质量评价指标。 本论文运用HPLC-FTICRMS分析技术,分析检测了大鼠口服朝鲜淫羊藿水提物后体内有效成分及其代谢产物,得到了这些化合物分子离子和多级碎裂的碎片离子的高分辨质量数和多级质谱信息,测定精确质量数准确度均小于3 ppm,计算了分子组成;依据多级质谱数据,总结质谱裂解规律,共分析和鉴定了大鼠体内出现的9个黄酮类成分,其中3个首次在大鼠体内发现。通过比较给药液和体内生物样本的差异,推断了淫羊藿总黄酮在大鼠体内可能的代谢途径。通过代谢产物的鉴定和代谢途径的研究,证实了淫羊藿异戊烯基黄酮的体内代谢转换主要是Ⅰ相代谢(去糖基化),以及进一步发生的Ⅱ相代谢(乙酰化)。 基于药材中主要药效成分的定量分析和大鼠体内代谢产物研究鉴定的结果,选择大鼠体内出现的主要7个黄酮类成分作为研究对象,建立了超高效液相色谱与串联四级杆质谱联用(UHPLC-MS/MS)的分析方法进行大鼠体内代谢指纹图谱的研究,研究结果表明,7个主要的黄酮成分均广泛分布于大鼠不同的组织脏器中,可以代表淫羊藿药材在体内物质基础变化情况,是淫羊藿体内的重要药效物质。另外研究结果也表明,色谱指纹图谱不同的两类淫羊藿,其体内代谢指纹图谱也明显不同。 最后本论文还建立了UHPLC-MS/MS方法测定犬灌胃给予淫羊藿单方和复方二仙汤后7种黄酮成分在犬血浆中的浓度,进行了方法验证,结果表明,所建立的UHPLC-MS/MS分析方法能够满足7种黄酮成分在犬血浆中准确测定的要求,进行了单方及复方中5种成分犬血浆药代动力学研究,并比较了单方及复方中5种成分的相对生物利用度,结果表明淫羊藿单方给药后5种成分生物生物利用度高于复方给药,从药代方面为淫羊藿复方配伍研究提供参考依据。


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