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蕈样肉芽肿候选肿瘤标记物 PRDX1、PPIA、MnSOD和FABP5的初步研究

曾跃平  
【摘要】:研究背景: 蕈样肉芽肿(mycosis fungoides, MF)是最常见的原发性皮肤T细胞淋巴瘤,以小到中等程度大的具有脑回状核的T淋巴细胞亲表皮性增生为特征。由于与多种良性淋巴细胞增生性疾病和反应性皮肤疾病相似,MF不易确诊,特别是在疾病早期。MF目前无特异性的肿瘤标记物,可用于疗效观察和判断预后的生物学标记物十分有限。近年来,蛋白质组学已初步开始用于MF肿瘤标记物的研究。本课题组前期通过双向凝胶电泳结合MALDI质谱对MF患者皮损组织和正常人皮肤组织进行比较分析,鉴定出31种差异表达蛋白质,其中锰超氧化物歧化酶(MnSOD)、脂肪酸结合蛋白5(FABP5)和S100A8这3种蛋白质经多组比较反复在MF皮损组织表达增高。之后提取MF皮损组织和正常人皮肤组织总蛋白,应用免疫印迹法(Western blot, WB)证实上述3种蛋白在MF皮损组织高表达。 目的: (1)用相应抗体验证另外两种质谱鉴定出的差异表达蛋白即过氧化氢酶1(peroxiredoxin 1, PRDX1)和肽酰-脯氨酰-顺反式异构酶A(peptidyl-prolyl isomerase Cyclophilin A, PPIA)在MF患者皮损组织和正常人皮肤组织中的差异表达; (2)定位PRDX1、PPIA、MnSOD和FABP5在MF患者皮损组织和正常人皮肤组织中的差异表达部位; (3)找到MF皮损淋巴细胞内差异表达的相关蛋白,研究其在人皮肤T细胞淋巴瘤细胞系(Hut-78)中的表达。 方法: (1)提取正常皮肤组织和MF皮损组织总蛋白,用WB法检测PRDX1和PPIA的表达; (2)用免疫组化法定位PRDX1、PPIA、MnSOD和FABP5这4种蛋白在MF组织中的表达; (3)采用正常PBMCs和Hut-78细胞,WB法和免疫细胞化学法检测MF皮损组织淋巴细胞内出现差异表达的相关蛋白。 结果: (1) PRDX1蛋白在MF皮损组织淋巴细胞中高表达,PPIA蛋白在MF皮损组织的表达与正常对照相比无明显差异,MnSOD蛋白在MF皮损组织的表皮和真皮淋巴细胞中高表达,FABP5蛋白在MF皮损组织表皮内高表达; (2)与正常PBMCs相比,PRDX1蛋白在Hut-78细胞中高表达,MnSOD蛋白在Hut-78细胞中表达降低。 结论: (1) PRDX1和MnSOD蛋白可能为MF潜在的肿瘤标记物; (2) PPIA和FABP5蛋白不适于做为MF的肿瘤标记物; (3)体外培养环境对皮肤恶性T淋巴细胞的MnSOD蛋白表达可能存在影响。


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