甲型H1N1流感病毒诱导呼吸道上皮细胞凋亡机理研究及PI4KB调控SARS冠状病毒细胞进入机理研究

【摘要】：2009甲流H1N1A/Wenshan H1N1诱导呼吸道上皮细胞凋亡 在2009年,一种新型猪起源的H1N1流感病毒在墨西哥出现,并很快传播到世界上包括中国在内的其它国家和地区。甲流H1N1流感病毒可以导致人呼吸道疾病,但是它的致病机理了解的仍然很少。我们研究了在中国分离到的甲流病毒株-A/Wenshan H1N1,与同时期的季节性流感在人呼吸道上皮细胞中进行了感染和致病性的比较。我们的结果显示A/Wenshan H1N1病毒在人鼻咽上皮细胞和人肺上皮细胞中诱导明显的细胞凋亡。A/Wenshan H1N1病毒在两种细胞系的进入效率明显强于季节性流感。病毒进入细胞的方式是clathrin和dyna min依赖的内吞方式。综上,我们发现甲流毒株A/Wenshan H1N1流感病毒可以诱导上皮细胞凋亡,为2009甲流的致病机理提供了可能的解释。PI4KB调控SARS-CoV spike介导的细胞进入机制研究 磷脂酰肌醇激酶在病毒感染后的生活周期中起到重要作用。利用siRNA基因敲减技术,我们证明PI4KB在SARS冠状病毒的spike介导的细胞进入过程中是必需的。SARS冠状病毒spike介导的细胞进入可以被PI4KB的敲减所抑制。与这个相对应的是,PI4KB的抑制剂可以明显的降低SARS假病毒的进入。进一步的研究发现PI4P位于这一过程的核心位置,PI4P构建了利于SARS假病毒进入的微环境。我们进一步证明了PI4KB不在SARS假病毒的受体结合及内吞过程中发挥作用,而在病毒膜融合之前发挥作用。综上,这些结果说明了PI4KB的一种新的功能,并为预防SARS-CoV的感染提供了新型的药物设计靶点。SARS冠状病毒DNA质粒免疫诱导中和抗体 急性呼吸性窘迫症是由SARS冠状病毒引起的疾病,致死率接近10%。仍然有在动物传播的危险,并可能再次感染人类。到目前还没有有效的治疗手段。中和抗体是针对病毒感染诱导的疾病的一个很有希望的治疗领域。而且中和抗体已经在逆转录病毒的治疗中显示了良好的效果。在这个领域用中和抗体治疗HIV的模型已经比较成熟。最近,针对流感病毒设计的中和抗体CR6261被报道。SARS冠状病毒的刺突蛋白是中和抗体的主要靶点。先前的研究集中在用病毒蛋白或多肽产生抗体。尽管这些是有效的手段,但需要很长的时间制备抗原。其它的方法如噬菌体展示也需要制备文库的大量前期工作。我们利用表达SARS冠状病毒的刺突蛋白表达质粒免疫小鼠几周后获得大量的可与刺突蛋白反应的中和抗体。进一步的研究证明DNA质粒免疫小鼠产生的抗体可以有效的中和SARS假病毒的细胞进入。尽管这些抗体不能直接作为治疗性的药物,但可以直接用于检测领域。