收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

红车轴草总黄酮对氧化应激诱导的血管内皮细胞和心肌细胞损伤的保护作用及机制研究

高蒙蒙  
【摘要】:缺血性心脏病(又称冠心病,Coronary Artery Disease)的发病率和致死率逐年增高,已成为威胁人类健康的重大疾病之一。近年来其发病年龄逐渐有年轻化的趋势,因而引起了广泛的关注。 动脉粥样硬化是诱发冠心病的始动因素,血管内皮细胞损伤是导致动脉粥样硬化的关键因素。心肌细胞坏死是冠心病的晚期病理特征,心肌细胞损伤是导致心肌细胞坏死的重要因素。因而,内皮细胞和心肌细胞损伤是导致冠心病发生发展的重要病理因素。大量研究表明,氧化应激是导致内皮细胞和心肌细胞损伤的主要原因。氧化应激是指部分还原形态的氧离子即活性氧自由基(Reactive Oxygen Species, ROS)的生成超过了细胞内源性解毒和/或使用能力的非稳定状态,体内过多的氧自由基将作用于蛋白质、核酸、脂类等生物大分子,并直接或间接地激活细胞内的多条信号转导通路来调节基因的表达,造成细胞结构和功能受损,最终导致细胞死亡。因而寻找具有抗氧化应激作用的化合物对于冠心病的预防和治疗都具有重要的临床意义。 具有抗氧化作用的黄酮类化合物是治疗和预防心血管疾病中草药的主要有效成分,研究发现红车轴草富含黄酮类成分,且红车轴草总黄酮(Red Clover Flavonoids. RCF)具有抗氧化作用,大量研究表明其在预防和治疗心血管疾病中具有潜在应用价值。而且,红车轴草来源广泛、价格低廉,具有明显的新药研发优势。但目前关于红车轴草总黄酮对氧化应激诱导的血管内皮细胞和心肌细胞损伤的保护作用及作用机制均鲜有报道。因而本实验一方面采用体外细胞培养,建立以H2O2为刺激因素的氧化应激损伤模型,探究红车轴草总黄酮对H2O2诱导的心肌细胞和内皮细胞损伤的保护作用,并探讨其初步作用机制;另一方面采用异丙肾上腺素(Isoprotenenol, ISO)诱导大鼠急性心肌缺血模型,探讨红车轴草总黄酮对异丙肾上腺素诱导的大鼠急性心肌缺血的保护作用及作用机制,以期为开发红车轴草总黄酮治疗缺血性心脏病提供实验依据。 本课题分为三个部分: 第一部分红车轴草总黄酮对过氧化氢诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用 实验目的:研究红车轴草总黄酮对过氧化氢诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用,并进一步探究其作用机制。 实验方法:利用体外培养的人脐静脉血管内皮细胞ECV-304,采用H202诱导细胞损伤模型,观察红车轴草总黄酮对H202所致的血管内皮细胞损伤的保护作用。MTT法检测细胞存活率、试剂盒测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性及细胞中丙二醛(MDA)的含量、乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量;分光光度计法检测Caspase-3的活性;Hoechst33342及PI荧光染色法观察红车轴草总黄酮对H202诱导血管内皮细胞凋亡的影响;JC-1染色法检测红车轴草总黄酮对H202诱导血管内皮细胞线粒体膜电位的影响,检测各组细胞内ROS的表达水平。 实验结果:与空白对照组相比,模型组血管内皮细胞存活率降低、细胞内LDH漏出量显著增加(P0.001);抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px活性显著降低、MDA含量显著升高(P0.01)、Caspase-3活性升高(P0.001)、ROS含量升高、线粒体膜电位降低;与模型组相比,红车轴草总黄酮各剂量组(12.5、25、50μg/mL)及槲皮素组(30μg/mL)细胞存活率明显增加(P0.01,P0.05),红车轴草总黄酮各剂量组(12.5、25、50μg/mL及槲皮素组(30μg/mL)均能显著降低LDH漏出量(P0.01,P0.05)、明显增强SOD、CAT及GSH-Px活力(P0.01,P0.05)、降低MDA、ROS含量及Caspase-3活性(P0.05,P0.01,P0.001)、升高线粒体膜电位(P0.01)。 结论:红车轴草总黄酮对H202诱导的血管内皮细胞损伤有明显的保护作用,其初步作用机制可能与抗自由基、减轻脂质过氧化、降低Caspase-3活性及稳定线粒体膜电位有关。 第二部分红车轴草总黄酮对过氧化氢诱导的心肌细胞H9c2损伤的保护作用 实验目的:研究红车轴草总黄酮对过氧化氢(H202)诱导的心肌细胞损伤的保护作用,并进一步探究其作用机制。 实验方法:采用H9c2心肌细胞细胞系,建立H202损伤模型,培养24h后随机分为空白对照组、模型组、红车轴草总黄酮组(25、50、100μg/mL)及槲皮素组(20μg/mL),各给药组预孵育6h后进行H202损伤造模。观察红车轴草总黄酮对H202诱导的心肌细胞损伤的保护作用的量效、时效关系,采用MTT法检测细胞活力,试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量、丙二醛(MDA)的含量、过氧化氢酶(CAT)及超氧化物歧化酶(SOD)活力。H33342及PI荧光染色法检测细胞凋亡。检测各组细胞中促凋亡蛋白Bax、抗凋亡蛋白Bcl-2、MAPK家族(JNK、ERK、P38)及其磷酸化形式(p-JNK、p-ERK、p-P38)等蛋白的蛋白表达水平。 实验结果:与空白对照组相比,模型组心肌细胞存活率降低、细胞内LDH漏出量增加、SOD活性降低、MDA含量升高、CAT活性降低(P0.001)、细胞内促凋亡蛋白Bax表达水平升高、MAPK家族的磷酸化形式p-ERK、p-ERK、p-P38表达水平升高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平下降;与模型组相比,预孵育6h后,红车轴草总黄酮各处理组(50、100μg/mL)细胞存活率明显增加(P0.001),红车轴草总黄酮各处理组及槲皮素组均能非常明显降低LDH漏出量(P0.001)、明显增强SOD和CAT活力、降低MDA含量(P0.01),细胞内Bax表达水平下降,MAPK家族的磷酸化形式(p-JNK、p-ERK、p-P38)表达水平下降,Bcl-2表达水平升高。 结论:红车轴草总黄酮对H202诱导的心肌细胞损伤有明显的保护作用,其初步作用机制可能与抗自由基、减轻脂质过氧化作用、下调Bax表达、上调Bcl-2表达及调节MAPK家族相关蛋白的磷酸化等有关。 第三部分红车轴草总黄酮对异丙肾上腺素诱导的大鼠急性心肌缺血的保护作用 实验目的:探讨红车轴草总黄酮对异丙肾上腺素诱导的大鼠急性心肌缺血的保护作用及其作用机制。 实验方法:探讨红车轴草总黄酮对异丙肾上腺素诱导的大鼠急性心肌缺血的保护作用。将红车轴草总黄酮按高、中、低(200、100、50mg/kg)三个剂量对SD大鼠进行灌胃给药15天,于给药第14、15天大鼠皮下注射异丙肾上腺素(4mg/kg, s.c.),给药结束后腹主动脉取血,检测血清中谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的水平;4%多聚甲醛灌注后对心脏行HE染色;检测心脏组织中丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽还原酶(GR)的活力及过氧化物酶(POD)、活性氧自由基(ROS)的水平。 实验结果:与空白对照组相比,异丙肾上腺素模型组血清中AST、CK、LDH水平显著升高(P0.01),心脏组织中SOD、T-AOC、GR、GSH-Px、POD活力显著降低(P0.01),MDA和ROS含量显著升高(P0.01);而给予红车轴草总黄酮后,可显著抑制血清中AST、CK、LDH水平的升高,显著抑制心脏组织中SOD、T-AOC、 GR、GSH-Px、POD活力的降低(P0.01),对心肌细胞有良好的保护作用。 结论:红车轴草总黄酮对异丙肾上腺素诱导的大鼠急性心肌缺血有明显的保护作用,.其初步作用机制可能与抗自由基、减轻脂质过氧化作用、增强抗氧化酶活力等有关。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 刘宝剑;郭延生;曲亚玲;刁鹏飞;魏彦明;;红车轴草总黄酮体外抗氧化作用的研究[J];中国药学杂志;2009年16期
2 刘宝剑;郭延生;曲亚玲;刁鹏飞;魏彦明;;红车轴草总黄酮对小鼠免疫功能的影响[J];安徽农业科学;2009年33期
3 高蒙蒙;孙桂波;斯建勇;秦蒙;罗云;孟祥宝;王敏;孙晓波;;红车轴草总黄酮对H_2O_2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用[J];中国药理学通报;2013年02期
4 ;[J];;年期
5 ;[J];;年期
6 ;[J];;年期
7 ;[J];;年期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
11 ;[J];;年期
12 ;[J];;年期
13 ;[J];;年期
14 ;[J];;年期
15 ;[J];;年期
16 ;[J];;年期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 刘宝剑;红车轴草总黄酮抗氧化作用及其对免疫功能的影响[D];甘肃农业大学;2008年
2 高蒙蒙;红车轴草总黄酮对氧化应激诱导的血管内皮细胞和心肌细胞损伤的保护作用及机制研究[D];北京协和医学院;2013年
3 李斌;红车轴草总黄酮有效部位分离纯化工艺研究[D];湖南中医药大学;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978