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磷脂药物中单一成分的定性定量分析及多肽药物中醋酸检测方法研究

李婧华  
【摘要】:生化药物是从生物体中分离、纯化或者通过化学合成或生物技术制备得到的用于预防、治疗和诊断疾病的生化物质。其中,磷脂药物及多肽药物是生化药物的重要组成部分。本论文分为磷脂药物中单一成分的定性定量分析及多肽药物中醋酸检测方法研究两部分。第一部分实验首先考察了硅胶柱、二醇柱和Hilic色谱柱对蛋黄卵磷脂中磷脂组分的分离效果。在比较了各自的优劣势后,选择使用亲水相互作用色谱法,并以质谱作为检测器来分析磷脂药物。之后,以蛋黄卵磷脂、磷脂酰胆碱和牛肺表面活性物质为研究对象,通过质谱测得其中各磷脂化合物的精确质量数,推测化合物的元素组成,并从所获得的二级碎片离子中寻找化合物的断裂规律,解析磷脂的化学结构,再经LipidMaps数据库搜索,验证结果的正确性。总结了磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱、鞘磷脂、磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油及缩醛磷脂酰乙醇胺的结构解析方法,从三种磷脂类药物中共发现了133种磷脂化合物。最后,以替诺福韦十八烷氧乙基单酯衍生物为内标,检测了肺表面活性物质中二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)的含量,并进行了方法学验证。实验结果显示,DPPC质量浓度在2.152-21.52μg/ml内线性关系良好(r2=0.9992);平均回收率(n=9)为107.78%,RSD为8.18%;4批牛肺表面活性物质中DPPC含量分别为19.26%、35.66%、35.89%、35.07%。本方法灵敏度高、专属性强、准确度及精密度良好,适用于牛肺表面活性物质中DPPC的定量分析。第二部分实验利用离子抑制色谱法进行了醋酸曲普瑞林注射液及注射用醋酸奥曲肽这两种多肽药物中醋酸含量测定。采用Rezex ROA-Organic Acid H+(7.8×300mm)色谱柱,流动相为0.0025 mol/L硫酸,流速0.5 ml/min,柱温45℃,检测波长为210 nm,醋酸的含量按峰面积以外标法计算。实验结果显示,醋酸的检测限为78.89 ng/ml,定量限为197.2 ng/ml;醋酸在0.3944~78.89μg/ml范围内线性关系良好(r=0.9999);平均回收率(n=9)分别为98.69%、107.09%,RSD分别为0.51%、1.34;三批醋酸曲普瑞林注射液中的醋酸含量分别为23.99μg/ml、22.38μg/ml、22.96 μg/ml,三批注射用醋酸奥曲肽中醋酸含量为2.15%、2.10%、2.08%。本方法环保、简便、准确度及精密度良好,适用于多肽药物中醋酸的定量分析。


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