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以激素敏感性脂肪酶为靶点的天然减肥药物的初步筛选

李欣  
【摘要】:目的: 肥胖症是危害人类健康的全球性疾病。肥胖增加人类患其他疾病的危险性,包括高血压,血脂异常(如高胆固醇,高甘油三酯),2型糖尿病,冠心病,中风,胆囊疾病,骨关节炎,睡眠呼吸暂停,子宫内膜癌,乳腺癌,结肠癌等肿瘤和心理疾患。白色脂肪组织中脂肪的合成和分解与肥胖症的发生、发展关系密切。增加脂肪分解有助于减少脂肪细胞中甘油三酯的储存。激素敏感性脂肪酶(HSL)是脂肪分解过程中的主要限速酶,在脂肪分解过程中起重要的作用。通过细胞转染技术,将含人脂肪组织HSL基因启动子的荧光素酶表达质粒稳定转染小鼠3T3-L1前脂肪细胞中,并以此为工具,从众多中药天然化合物中寻找对HSL启动子活性有影响的药物,再通过动物实验观察药物对高脂膳食昆明小鼠体重、糖脂代谢的干预作用,及对小鼠体内白色脂肪组织HSL基因表达的影响,探讨以HSL为减肥药物筛选靶点的可行性。 方法: 1.建立含人脂肪组织HSL基因启动子的荧光素酶表达质粒的稳定转染小鼠3T3-L1前脂肪细胞株:以人基因组DNA为模版,克隆人脂肪组织HSL基因启动子序列(-697-+53bp),将该片断插入到含荧光素报告基因的质粒载体pGL3-Basic-Luc中,得到含人HSL基因启动子序列(-697-+53bp)的荧光素酶表达质粒。然后用脂质体转染法,将该质粒转染到小鼠3T3-L1前脂肪细胞中,经筛选药物Geneticin(G418)筛选,获得表达荧光素酶的稳定转染单克隆小鼠3T3-L1前脂肪细胞株。 2.50%乙醇中药提取液(extracts of Chinese medical herbs,ECMH)对人HSL基因启动子活性的影响:含人HSL基因启动子序列的荧光素酶报告质粒,其荧


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