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小鼠肥大细胞基因表达特征及新的丝氨酸蛋白酶基因MMCP-10克隆研究

冯四洲  
【摘要】:小鼠肥大细胞基因表达特征及新的丝氨酸蛋白酶基因MMCP-10克隆研究 目的 肥大细胞是IgE相关过敏反应的重要效应细胞,在过敏反应发生的过程中伴随有调控基因表达水平的变化,肥大细胞释放已形成的颗粒性介质、多种细胞因子、趋化因子及其它免疫调节分子,所有这些变化的发生与肥大细胞的激活有关。早期对肥大细胞的研究主要集中在肥大细胞功能及生化方面的变化,近年有些与肥大细胞激活有关的基因已被识别,其中某些基因的表达蛋白的功能也逐步得到认识。本研究的目的是对小鼠静止的与激活的骨髓源性肥大细胞(BMMC)基因表达谱进行广泛的研究,以期发现肥大细胞新的功能相关基因,为临床研究过敏反应的发生机制及寻找新的治疗手段提供依据。 方法 1.有一种逆转录病毒介导的信号序列捕获法称之为SST-REX,由于其逆转录病毒载体pMX-SST具有指导突变的血小板受体MPL(MPL~m)在细胞膜表达的能力,因此,能导致白细胞介素-3(IL-3)依赖的前-B细胞株Ba/F3细胞IL-3非依赖性生长。我们利用MPL~m的这一特性,用载体pMX-SST对小鼠静止的与激活的BMMC cDNA文库进行筛选。 2.提取IL-3非依赖性生长的Ba/F3细胞基因组DNA后,采用PCR回收已插入到Ba/F3细胞中的小鼠静止的与激活的BMMC cDNA。


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