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一种新的Kelch结构域蛋白HCLP-1的功能研究

周海军  
【摘要】:生物体的发育、分化、代谢等整个生命过程中的基因表达都是在严格的调控下进行的。转录水平的调控是特定基因表达调控的中心环节,转录因子在转录调控中发挥关键作用,转录因子通过与调控元件及其它蛋白因子之间的相互作用完成复杂的转录调控过程。近年来,KELCH蛋白家族在真核基因表达调控中的作用受到了广泛关注。KELCH基序是最先发现于果蝇ORF1蛋白中的一种串联重复序列。KELCH重复形成保守的β螺旋浆结构,从而介导蛋白质相互作用。KELCH超家族成员众多,在生命过程中发挥多种功能,如细胞骨架的调节,细胞形态以及介导病毒感染和基因表达调控等等。宿主细胞因子(Host Gell Factor,HCF)是一种细胞转录激活辅因子,属于KELCH超家族成员,与VP16,Oct-1,LZIP和GABP等转录相关蛋白相互作用形成增强子复合物。这种相互作用是由HCF蛋白N端的380个氨基酸组成的β螺旋浆结构介导的。通过相互作用和其他尚未明了的机制,HCF参与介导单纯疱疹病毒感染和细胞增殖。HCF家族其他成员(HCF2和线虫ceHCF)的相继克隆,为更加深入地研究HCF家族的功能提供了条件;目前已经发现KELCH蛋白在细胞的正常生理过程及某些人类疾病的病理过程中发挥了重要作用。 本研究利用基因组信息学方法,根据EST数据库中与编码HCF蛋白N端β螺旋桨结构域cDNA序列同源的EST设计引物、制备探针,在人胎脑文库中筛选到一个新的全长为1680bp的cDNA克隆,此cDNA的开放读码框为1221bp,编码一个全长为406个氨基酸残基的蛋白质。同源性分析结果表明,此蛋白质与HCF-1的β螺旋桨结构域有30%的相同性和45%的相似性,推测其整个蛋白形成一个6叶槳的β螺旋浆结构。因此我们将新克隆的基因命名为HCF-like kelch repeat protein 1,HCLP-1(AF113131)。为了分析新基因HCLP-1的组织表达谱,我们进行了Northern杂交实验,结果显示HCLP-1在进行研究的组织和肿瘤细胞中均有表达,证明HCLP-1是一个广泛表达的基因。蛋白质在细胞中的定位信息,对蛋白质的功能有重要提示作用。为了对HCLP-1蛋白进行功能鉴定,我们首先应用共聚焦显微镜技术,研究了HCLP-1蛋白的亚细胞定位情况,结果证实HCLP-1是一个的细胞核蛋白。蛋白质在细胞内的生理功能往往是通过与其它蛋白相互作用实现的。为了寻找β螺旋桨结构域蛋白HCLP-1的相互作用蛋白。我们在酵母双杂交实验中检测HCLP-1是否与HCF的相互作用蛋白VP16和LZIP等转录调控因子相互作用。随后我们又应用


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1 周海军;一种新的Kelch结构域蛋白HCLP-1的功能研究[D];中国协和医科大学;2002年
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