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人乳头瘤病毒6型衣壳蛋白L1和L2基因的克隆、表达及病毒样颗粒的装配与免疫学分析

王淼  
【摘要】:人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)是一类双链小分子DNA病毒,具有严格的种属特异性,主要感染人的皮肤和粘膜组织,引起相应部位上皮组织的增生性病变。外生殖器疣(exophytic genital wart,EGW)主要是由人乳头瘤病毒6型(HPV-6)和11型(HPV-11)感染人生殖器官及肛周表皮引起上皮良性增生的一种常见性传播疾病。尽管现在有多种治疗EGW的方法,但各种方法治疗后都有一定复发率,还没有一种方法对于任何临床阶段的病症都有理想的疗效。疫苗防治EGW是近年来的研究热点。 目前HPV疫苗研究主要集中于基因工程生产HPV亚单位疫苗。HPV衣壳是由L1和L2蛋白共同构成,L1蛋白或L1+L2蛋白在真核细胞表达可以自发组装成病毒样颗粒(virus-like particle,VLP),VLP和天然PV的形态结构相似,内部无病毒核酸,保留了天然病毒粒子的抗原表位,免疫原性强,在动物实验中可诱导机体产生保护性中和抗体。VLP是最有希望的HPV预防性候选疫苗。大肠杆菌中表达时L1不能自动装配成VLP,需要经过复杂的变性复性过程,并且得率非常低。我们选择杆状病毒载体在昆虫细胞中表达从我国尖锐湿疣患者病损组织克隆的HPV-6 L1和L2基因,用于研制基于VLP的EGW预防性疫苗。获得如下实验结果: 1.尖锐湿疣标本HPV-6 L1和L2基因的克隆与序列分析 对来自尖锐湿疣患者病变组织提取的病毒DNA分型后,分别从HPV-6阳性标本中扩增出主要衣壳蛋白L1和次要衣壳蛋白L2基因片段,插入质粒载体pGEMT easy,经测序、拼接获得两条长2869bp的HPV-6基因组晚期区序列(GenBank序列索取号AY015006,AY015008),包含完整的L1和L2开放阅读框(ORF)。与原型序列比较,在L1和L2 ORF中共有9个核苷酸变异,其中错义突变4个(有3个发生在L2 ORF,1个在L1 ORF),分子进化分析表明克隆的晚期区序列属于HPV-6b亚型,晚期区编码


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