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(-)黄皮酰胺对脑缺血损伤和APP转基因小鼠的保护作用及机制

唐康  
【摘要】:第一部分 (一)黄皮酰胺对原代培养大鼠皮层神经原胞内钙的影响 过去的研究已发现(-)黄皮酰胺可升高细胞内钙,为进一步阐明(-)黄皮酰胺作用的机理,采用激光共聚焦显微术观察了(-)黄皮酰胺对原代培养的皮层神经元胞内钙的影响。1μM(-)黄皮酰胺可引起神经元胞内钙瞬变,在有钙和无钙细胞外液中(-)黄皮酰胺诱导产生的钙瞬变的幅度接近,内质网钙泵抑制剂BHQ也可抑制此反应,说明(-)黄皮酰胺升钙途径为胞内钙释放,主要来源为内质网钙库。 加入IP_3受体的抑制剂MgCl_2和PLC-γ抑制剂U73122抑制IP_3的生成后,(-)黄皮酰胺不能诱发钙瞬变;加入100μM ryanodine抑制ryanodine途径的钙释放后(-)黄皮酰胺仍可诱发钙瞬变,其幅度与未加ryanodine时相近,说明ryanodine途径基本不参与(-)黄皮酰胺诱导的钙瞬变,进一步确定(-)黄皮酰胺诱导的钙瞬变主要是来源于IP_3途径。 在无钙液中加入钙荧光淬灭剂Mn~(2+)后如果内质网IP_3钙库动员则会导致Mn~(2+)从膜上容量性钙通道进入,(-)黄皮酰胺此时只能产生一个较小的钙瞬变,提示(-)黄皮酰胺可以引起外钙从容量性钙通道进入充盈钙库。 线粒体也参与(-)黄皮酰胺引起的钙瞬变,但不是直接作用。 使用无钠细胞外液抑制质膜上钠-钙交换体后,(-)黄皮酰胺诱导的钙瞬变的衰减明显变缓,说明钠-钙交换体在(-)黄皮酰胺诱导的钙瞬变的钙外排中起重要作用。 给予 1μM(-)黄皮酰胺刺激后,当钙瞬变幅度较大时,细胞便不再对高钾刺激有反应,而当(-)黄皮酰胺诱导的钙瞬变偏小时,高钾仍能升高胞内钙。


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