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红豆杉属植物细胞的离体培养和产生紫杉醇的研究

陈永勤  
【摘要】:紫杉醇(Taxol)是从红豆杉属植物(Taxus.L)的树皮和枝叶中分离出来的对卵巢癌和乳腺癌有特殊疗效的抗肿瘤药物。有限的红豆杉属植物资源使得紫杉醇成为一种比较昂贵的药物,并影响到它在临床上长期、广泛的应用。多年来,人们一直在致力于寻找解决紫杉醇药源的新途径。红豆杉属植物的组织与细胞培养被认为是一种有潜力的方法之一而受到人们的重视。 在本试验中,从云南红豆杉(T.yunanensis)、东北红豆杉(T. cuspidata)、红豆杉(T.chinensis)、南方红豆杉(T.chinensis var.mairei)和杂种红豆杉(T.media)的不同植株或外植体建立了14个愈伤组织系;研究了2,4-D浓度、采样季节和光照条件对云南红豆杉和东北红豆杉的茎段形成愈伤组织的影响;比较了不同愈伤组织系的生长速率和紫杉醇含量的差异,选出了一个生长较快、紫杉醇含量较高的愈伤组织系(TY6);研究了愈伤组织和悬浮细胞的生长动态和紫杉醇积累动态,以及影响愈伤组织和悬浮细胞生长和生产紫杉醇的一些因素。 1.在诱导培养基(B_5培养基的无机盐、肌醇100.0 mg·L~(-1)、烟酸1.25 mg·L~(-1)、维生素B_1 1.0 mg·L~(-1)、维生素B_6 0.5 mg·L~(-1)、蔗糖20.0 g·L~(-1)、水解乳蛋白1.0 g·L~(-1)、6-苄基氨基嘌呤(BAP)0.1 mg·L~(-1)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)1.0~3.0 mg·L~(-1)和琼脂8.0 g·L~(-1))上,50%~100%的云南红豆杉、东北红豆杉、红豆杉、南方红豆杉和杂种红豆杉的茎段可以形成愈伤组织。云南红豆杉和南方红豆杉的茎段形成愈伤组织的最佳2,4-D浓度为2.0 mg·L~(-1)。云南红豆杉在春季和秋季都有较高的愈伤组织形成率(70%以上);但对于东北红


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