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一种新的睾丸组织特异性核孔蛋白cDNA BS-63的克隆、特性分析及表达

朱海东  
【摘要】:精子的发生与成熟是一个十分复杂的过程,受多种蛋白的调节。越来越多的编码精子相关蛋白的基因已经被克隆、鉴定,它们在睾丸组织中的转录和翻译是十分复杂的,在精子发生中的作用也正在深入研究中。本课题组在以前的工作中曾从兔精子尾部分离、纯化了一种分子量为20KD的蛋白,命名为rSMP-B,用这种纯化蛋白去免疫成年雄兔,发现精子生成停滞于精子细胞阶段,rSMP-B的单克隆抗体可以抑制人精子穿透去透明带仓鼠卵,并可与人和大鼠睾丸细胞质中的一种特异性蛋白发生交叉反应,提示rSMP-B具有种属同源性,是一种在精子发生过程中发挥重要作用的蛋白。以rSMP-B的单克隆抗体筛选大鼠睾丸λ gt11 cDNA表达文库,得到一全长为2069bp的cDNA片段,命名为RSD-1,已被GenBank接收,接收号为U26723。 本论文工作即在此基础上,筛选得到了一相应的编码人精子相关蛋白的基因,并对其进行了深入的研究。首先以RSD-1 2.0kb为探针分别筛选人睾丸λ gt10 5′-stretch和λ ZAPⅡ两个cDNA文库,得到12个阳性克隆,又经过Southern blot的进一步验证。对其中三个较大的克隆H0620(2703bp),H0609(1730bp),H0324(1933bp)进行了核苷酸序列测定及同源性比较分析,发现这三个克隆之间存在着区域性同源、变异与缺失,可能是同一基因产物的不同转录形式,是由于mRNA的变位剪接引起的,这种多形式变位剪接的mRNA在特定生理条件下均有一定功能,可能与睾丸组织中精子发生具有严格的周期、阶段性有关。其中H0324号克隆全长1933bp,开放阅读框架为1824bp,编码608个氨基酸,计算编码蛋白的分子量为67KD,命名为BS-63,已经被GenBank收录,接收号为U64675。进一步查询GenBank进行同源性比较发现,BS-63的N端近2/3区域与从人Hela细胞表达文库中筛选出的核孔蛋白RanBP2(Nup358)高度同源。它们都具有脊椎动物核孔蛋白的典型特征,既含有XFXFG或FG重复序列,又有潜在的O-连接的GlcNAc糖基


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