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E1A基因对头颈淋巴结转移性鳞癌的生长抑制和化、放疗增敏作用

王晓雷  
【摘要】:目的:探讨E1A基因对头颈淋巴结转移性鳞癌细胞体内、外生长的抑制作用和化、放疗增敏作用,并对其机理进行了初步探讨。方法:将真核细胞高效表达E1A基因的重组质粒pcDNA3.1-E1A,经脂质体介导,导入舌癌的淋巴结转移癌细胞系-LN686。经G418筛选,获得稳定表达E1A基因的细胞LN686-E1A,并通过PCR、RT-PCR及免疫细胞化学染色的方法加以鉴定。通过测定生长曲线、倍增时间、和裸鼠抑瘤实验,观察了E1A基因对该细胞系生长的抑制作用。用不同浓度顺铂、泰素、5-FU及博莱霉素等化疗药物及射线处理转染E1A的细胞(LN686-E1A)及空载体转染的细胞(LN686-vect)和亲本细胞,用MTT法测定各种细胞被杀伤的比率,观察了E1A基因对人头颈淋巴结转移性鳞癌细胞的化疗和放疗的增敏作用。以裸鼠模拟临床E1A基因治疗,观察了E1A基因及化疗和基因治疗联合应用在整体动物应用的可行性及疗效。通过流式细胞仪测定和免疫细胞化学染色检测了转染前后细胞周期分布的变化以及p53基因和HER-2/neu基因的变化,对EIA基因的作用机理进行了初步的探讨。结果:PCR、RT-PCR及免疫细胞化学染色结果表明:E1A基因己整合到LN686-E1A细胞基因组DNA中并稳定表达。转染细胞(LN686-E1A)群体生长缓慢(倍增时间是LN686-vect细胞的1.48倍),细胞周期G2期阻滞。裸鼠抑瘤实验中LN686-E1A细胞形成的肿瘤较LN686和LN686-vect的出瘤时间晚,生


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