小鼠胸腺衰老相关新基因的克隆及功能鉴定

【摘要】：特异性免疫应答依赖于T淋巴细胞，而胸腺是T淋巴细胞发育和分化的重要场所。T细胞的前体细胞从骨髓迁移至胸腺，在胸腺经历了阴性选择和阳性选择，最终只有5％的T细胞发育成熟并输出到外周淋巴器官发挥免疫应答功能。对于免疫系统而言，胸腺处于十分重要的地位，在机体衰老过程中，胸腺比其它器官表现出更明显的增龄性改变—退化(萎缩)。我们推测这一过程必然与其它代谢过程一样受控于遗传，伴随众多基因的参与。然而，迄今为止我们对其基因调控机制还所知甚少。因此，从胸腺中寻找与衰老相关的未知或已知基因，并探讨它们在T淋巴细胞分化发育及衰老过程中的作用将有助于深入阐明老化免疫的机制。 为了寻找增龄相关性胸腺基因，本研究采用了以下研究策略与路线：首先，采用差异显示反转录PCR技术(DDRT-PCR)对1月和10月龄小鼠胸腺mRNA的差异表达情况进行了分析；其次，以基因的差异片段(EST，expressed sequence tag)进行Northern杂交以鉴别其假阳性；再次，综合运用EST筛选cDNA文库、cDNA末端快速扩增(RACE)、EST拼接结合RT—PCR等实验技术克隆差异片段所代表的全长基因；随之进行基因和蛋白序列的预测；最后，进行基因表达谱分析和初步功能的研究。 依据上述策略与路线，本研究获得以下研究结果： 1、增龄相关性小鼠胸腺基因表达分析和获得增龄差异性胸腺基因片段 我们采用差异显示反转录PCR技术(DDRT-PCR)对1月和10月龄Balb／c小鼠胸腺