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大鼠单克隆抗体的制备、鉴定、基因克隆、抗原分析以及药物偶联物的抗肿瘤作用研究

江敏  
【摘要】:大鼠抗体具有一些小鼠抗体不具备的特点,抗体分子的轻链95%为κ型。因此可以利用小鼠抗大鼠抗体Igκ-1a抗体,高度特异性地将接种于Igκ-1b大鼠体内的具有Igκ-1a等位基因杂交瘤抗体分离纯化出来。通常认为大鼠杂交瘤单克隆抗体难以制备获取。本研究用人免疫球蛋白IgG、IgM和辣根过氧物酶免疫LOU/C大鼠,并与大鼠IR983F细胞融合,获得数株抗人IgG、IgM和辣根过氧化物酶的单克隆抗体,融合率在70%以上,杂交瘤能在培养条件下长期生长并稳定地分泌抗体,动物体内接种能产生含有较高浓度抗体的腹水,抗体的提取方法简便、有效,ELISA测定显示数株单克隆抗体均有较高的亲和力,亲和常数为10~7-10~(10)M~(-1),因此用大鼠杂交瘤技术制备高亲和力的单克隆抗体是可行的,有利于抗体的大量制备。 以人肝癌BEL-7402细胞作为靶抗原免疫LOU/C大鼠,取其脾细胞与大鼠IR983F骨髓瘤细胞融合,获得稳定分泌抗人肝癌单克隆抗体3A5杂交瘤细胞株。ELISA交叉反应检测3A5对人肝癌BEL-7402、7721和Q3细胞皆呈强阳性,对人口腔鳞癌KB细胞、人胚肺2BS细胞和小鼠正常肝细胞等呈阴性。免疫组织化学检测单抗3A5对人体各正常器官组织的交叉反应显示,此抗体对人正常心、肝、脾、肺、淋巴结,中枢神经系统、肾小球、甲状腺、血液细胞等均无反应,对肾小管上皮细胞显示弱阳性,而对临床肝癌、肠癌的病理切片则显极强的阳性反应。单克隆抗体经免疫亲和层析分离后,SDS-PAGE凝胶电泳显示抗体的纯度达95%以上,符合单克隆抗体临床应用的标准。免疫电镜研究显示,单抗3A5对靶细胞特异性结合与内化,肝癌细胞内单抗3A5胶体金颗粒簇数为0.89,KB细胞为0.22,相差4倍。肝癌细胞对胶体金颗粒的内化能被预先加入的单抗3A5特异性地封闭。将单抗3A5与平阳霉素进行偶联,用克隆生成法观察偶联物和游离平阳霉素对肿瘤细胞的杀伤作用,按IC50比较,偶联物对靶细胞肝癌细胞的杀伤作用(IC50=7.5×10~(-9)M)比对非靶细胞KB细胞的作用(IC50=7×10~(-7)M)约强100倍。偶联物对靶细胞的作用比游离平阳霉素(IC50=3×10~(-7)M)约强50倍。 单抗3A5用木瓜蛋白酶消化制备得单抗的Fab片段,抗体片段的反应活性略


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1 赵亚刚;陈希陶;张学庸;樊代明;;单克隆抗体导向平阳霉素对食管癌细胞的细胞毒特征[J];肿瘤基础与临床;1992年01期
2 王维刚,徐琳娜,张胜华,薛玉川,甄永苏;单克隆抗体与平阳霉素偶联物对肿瘤的区域性导向实验治疗[J];药学学报;1997年09期
3 陈维真;张勇;梁昌盛;谢瑶;温新桥;高新;;前列腺癌单克隆抗体与平阳霉素偶联物导向化疗的体外作用[J];南方医科大学学报;2008年03期
4 刘霆;抗肿瘤单克隆抗体靶向药物的研究进展[J];国外医学.生理.病理科学与临床分册;2003年03期
5 刘亚萍,吴剑波;单克隆抗体与链黑菌素免疫偶合物的制备及生物活性[J];药学学报;1992年07期
6 张云涛;路东;席仲兴;张正雷;曹馨匀;谢雍;;金霉素单克隆抗体的制备及检测方法的建立[J];微生物学免疫学进展;2008年04期
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8 刘小云,刘秀均,李毅,王维刚,甄永苏;平阳霉素与单克隆抗体Fab′片段偶联物的抗肿瘤作用[J];药学学报;2000年09期
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12 谢陶吟,赵虎,高向东;多糖单克隆抗体的研究进展[J];药学进展;2005年09期
13 宋波,戴垚,黎维勇,金文闻,陈华庭;蓖麻蛋白A链与单抗3G11偶联物的制备及体外生物活性研究[J];中国医院药学杂志;2005年10期
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15 刘世海;李荣华;王东阳;王丽娴;夏海滨;;人白介素24单克隆抗体的制备与鉴定[J];现代肿瘤医学;2011年09期
16 詹新立;李世德;肖增明;周江南;;单克隆抗体导向的间接和小型化偶联物的体内抗肿瘤作用及机制初探[J];广西医科大学学报;2007年04期
17 戴垚;刘秀均;甄永苏;;抗IV型胶原酶单抗与平阳霉素新型免疫偶联物的抗肿瘤作用[J];药学学报;2006年01期
18 吴中明;刘祖林;莫宁萍;顾榴珍;程一櫂;;分泌抗H_(615)单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立[J];遵义医学院学报;1988年01期
19 张云涛;路东;席仲兴;杨福军;张甲菊;谢雍;;泰乐菌素单克隆抗体的制备及竞争ELISA检测方法的建立[J];中国生物制品学杂志;2008年12期
20 翟凡;刘士山;刘晓力;乜华风;;抗—HBs单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立[J];内蒙古医学杂志;1985年04期
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1 刘小云;甄永苏;;以单克隆抗体为载体的抗肿瘤导向药物小型化研究[A];第四届中国新医药博士论坛论文集[C];1999年
2 刘小云;尚伯扬;刘秀均;甄永苏;;平阳霉素与单克隆抗体Fab’片段偶联物抑制肝癌生长与肿瘤肝转移[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年
3 张浩;吴晓东;陈静;张守富;单虎;吴延功;王志亮;刘佩兰;朱绍辉;;抗猪附红细胞体单克隆抗体的制备[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集[C];2008年
4 马文静;刘成成;张浩;;Bla g7单克隆抗体的制备与鉴定[A];中华医学会2009年全国变态反应学术会议论文汇编[C];2009年
5 夏兴霞;刘洁;王永山;诸玉梅;欧阳伟;何孔旺;张雪寒;;动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究 Ⅰ.分泌抗大肠杆菌0157:H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(下册)[C];2009年
6 陈宏翔;涂亚庭;林能兴;黄长征;张丽霞;严小枫;;淋球菌MtrC融合蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株建立和特性鉴定[A];中华医学会第十二次全国皮肤性病学术会议论文集[C];2006年
7 李娜;黄小波;曹三杰;文心田;;猪传染性胃肠炎病毒重组N蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会论文集[C];2008年
8 王雪峰;陈永井;王勤;代群;杨科芳;张学光;;一株鼠抗人BTLA单克隆抗体的研制及其生物学功能的初步研究[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年
9 伍祥林;郭景元;;分泌抗人B型红细胞单克隆抗体杂交瘤细胞株的研制[A];第五次全国法医学术交流会论文集[C];1996年
10 王勤;陈永井;谢芳;王雪峰;张学光;;一株激发型鼠抗人OX40L单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年
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1 江敏;大鼠单克隆抗体的制备、鉴定、基因克隆、抗原分析以及药物偶联物的抗肿瘤作用研究[D];中国协和医科大学;1996年
2 李军智;单克隆抗体及Fab片段与抗癌抗生素C1027偶联物抗肝癌的实验研究[D];中国协和医科大学;1992年
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10 马焕先;抗人FXYD3单克隆抗体的制备应用及蓖麻毒素细胞毒作用的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2008年
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1 王维;高迁移率族蛋白B1单克隆抗体的制备及其在竞争ELISA中的应用[D];天津医科大学;2007年
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