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在体血管缝线转基因法可行性探讨及尿激酶原基因在血管吻合中应用的实验研究

陈良万  
【摘要】:本研究在国内、外首次探讨了在体血管缝线转基因法的可行性,并应用这种新的转基因方法,把pro-uk基因导入血管吻合口,观察了pro-uK基因疗法对吻合口的血栓形成和再狭窄的预防作用。 在在体血管缝线转基因法可行性探讨的实验研究中,Wistar大鼠随机分为对照组和治疗组,对照组的大鼠应用浸泡过pN_2质粒蔗糖PBS溶液的缝线进行血管缝合,治疗组的大鼠则应用浸泡过pN_2-LacZ质粒蔗糖PBS溶液的缝线进行血管缝合。分批取出缝合的血管,进行组织DNA的Southern印迹杂交、β—半乳糖苷酶活性检测和组织化学染色。结果表明:治疗组术后2天、7天、90天提取的血管壁DNA,经HindⅢ酶切后与LacZ探针杂交,在5.4Kb处均有一杂交带,而对照组则无此杂交带。对照组术后2天、7天、14天、90天均未检测到β—半乳糖苷酶活性,治疗组术后2天即检测到β—半乳糖苷酶活性,7天活性最高,90天仍测得有活性。治疗组术后2天、7天、90天分别有100%、100%、80%的缝合血管壁β—半乳糖苷酶组织化学染色见有蓝染,蓝染见于血管壁内皮细胞、平滑肌细胞等,而对照组则无蓝染。 用浸泡过质粒蔗糖PBS溶液的11/0医用尼龙缝线,借助显微外科技术进行大鼠颈总动脉端端吻合,实验动物随机分为对照组和治疗组。对照组的缝线浸泡于pN_2质粒蔗糖PBS溶液,治疗组的缝线浸泡于pN_2-pro-uk质粒蔗糖PBS溶液。实验进行以下三方面的研究:(1).提取吻合口组织的DNA和RNA与pro-uk探针进行Southern、Northern印迹杂交,应用纤维蛋白平板溶圈法检测吻合口组织的纤溶酶活力,结果表明:治疗组Southern印迹杂交,在2.8Kb处有一杂交带,Northern印迹杂交在18S稍下方有一杂交带,而对照组则无这些杂交带。实验组在术后2天、7天、14天、90天均检测到纤溶酶活力,术后第7天活力最高。对照组则未检


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