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1. 干扰素诱导蛋白10在干燥综合征唇腺中异常表达的研究 2. 抗SSA/Ro噬菌体单链抗体库的构建与鉴定

周炜  
【摘要】:1、背景: 干燥综合征是主要累及外分泌腺体的弥漫性结缔组织病,病人外分泌腺体中有大量激活的CD4+T淋巴细胞灶性浸润,且炎症局部有IFN γ、IL-2、TNF α等多种细胞因子表达,被认为是Th1为主的免疫反应。淋巴细胞从血循环向炎性反应局部游走是一个多步骤调节过程,趋化因子在其中发挥重要作用。趋化因子干扰素诱导蛋白10(Interferon-inducible protein 10,IP-10)可较特异地对激活的T细胞产生趋化作用,其受体CXCR3在Th1细胞上表达增加。因此本文探讨IP-10是否参与干燥综合征唇腺的炎性反应。 2、方法: 共有49例病人行唇腺活检,标本进行HE染色检测并计数4mm~2组织中淋巴细胞浸润灶。对其中39例(原发性干燥综合征21例,继发性干燥综合征5例,其它疾病13例)行RT—PCR检测。提取总RNA并反转录成cDNA。根据IP-10 cDNA序列设计特异引物。以唇腺标本cDNA为模板,同时加入IP-10和β-actin的特异引物行PCR共扩增。扩增产物电泳后测量IP-10和β-actin相应条带的光密度,计算两者光密度的比值,对标本中IP-10 mRNA的表达水平进行半定量分析。有21例唇腺标本(原发性干燥综合征10例,继发性干燥综和征3例,其它疾病8例)用人IP-10特异抗体行免疫组化染色。有11例标本同时完成RT—PCR和免疫组化检测。 3、结果: 3.1 使用设计的引物行PCR反应,产物测序证实其与IP-10 cDNA序列一致。 3.2 干燥综合征病人唇腺标本IP-10与β-actin RT-PCR共扩增后光密度比值为0.329±0.157,而非干燥综合征病人为0.099±0.059,两者有显著差异p<0.05。继发性与原发性干燥综合征唇腺标本中IP-10的表达无显著差异。 3.3 IP-10与β-actin光密度比值与SS病人唇腺标本中淋巴细胞浸润灶计数呈正相关,相关系数为0.657,p<0.05。 3.4 免疫组化显示10例原发性干燥综合征唇腺中8例阳性(8/10),继发性干燥综合征3例均阳性(3/3),8例其它疾病中仅1例原发性胆汁性肝硬化阳性(1/8)。干燥综合征唇腺中导管上皮细胞及少数浸润的淋巴细胞有IP—10的着色,而腺上皮细胞未


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